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第四章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 本章要求 ⒈ 了解高效液相色谱法的优缺点 ⒉ 了解高效液相色谱仪的结构 ⒊ 掌握常用检测器的原理及应用范围 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 定义：以液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）：20世纪60年代末70年代 技术：高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器 特点：速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化 一、 概述 4.1 高效液相色谱法简介 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 1．高效液相色谱法与经典液相色谱法比较 ⑴ 高速：HPLC分离效率高，速度快，一次几分钟和几十分钟就可完成。色谱柱的寿命长，可达两年以上。 ⑵ 高效：HPLC高压(2~6 MPa)下操作，填料颗粒小(2~50 ?m)，规则均匀的固定相，传质阻力小，柱效高(N=4000~60000 块/m)，分离效率高。 ⑶ 高灵敏度：现代高效液相色谱仪普遍配有高灵敏度检测器，使分析灵敏度比经典色谱有大提高（紫外检测器最小检测限可达10-9 g；荧光检测器最小检测限可达10-11~10-13 g。 ⑷ 高自动化：HPLC进样量小(X~X0 ?L)。带有自动进样装置和工作站。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2．高效液相色谱法与气相色谱法的比较 ⑴ 适用范围 GC适用于沸点低、热稳定性好、中小分子量的化合物，HPLC不受此种限制。气相色谱一般都在较高温度下进行，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。 ⑵ 流动相 GC流动相仅运载样品，不起分离作用，但无毒，易于处理。而HPLC流动相除了运载样品外，还有分离作用，可改变流动相组成，进行有效的分离。但流动相一般有毒，费用高。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. ⑶ 色谱柱 GC柱很长，特别是毛细管柱可长至几十米至上百米，柱效很高(理论塔板数N=104~106)。HPLC柱较短，一般为15~25 cm，柱效(理论塔板数N=103~104)，低于GC柱。 ⑷ 检测器 与GC相比，HPLC检测器种类较多。 ⑸ 制备色谱 GC难以制备样品，因为进样量小，难以收集或被破坏。HPLC可进行制备，即制备色谱。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一﹑高效液相色谱仪的结构 4.2 高效液相色谱仪 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一般分为4个主要部分：高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度洗脱、自动进样及数据处理等。 工作过程如下： 首先高压泵将贮液器