基于分子自组装的双酶传感器快速计数大肠杆菌的研究.pdfVIP

第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传感器与生物分析化学 ∞5基于分子自组装的双酶传感器快速计数大肠杆菌的研究 唐辉，张文，耿萍，顾静，金利通‘ (华东师范大学化学系，上海200062) 微生物学检验，特别是肠道细菌的检测在保障人类健康和控制传染病等方面有着 重要意义【l】。大肠杆菌的数量常是直接反映环境被人畜排泄物污染的一项重要指标， 因此，大肠杆菌已经成为环境保护、食品卫生和临床化学等领域中的重要检测对象。 但是，传统的常规检测方法，如平板稀释法、浊度法等存在检测周期长(24--一48h)、 程序复杂、所需试剂繁多等缺点阳J。这些技术很难满足快速计数大肠杆菌的需要。 铟锡氧化物电极(ITO电极)上的自组装[41，通过戊二醛形成席夫碱，将多元酚氧化 酶(1accase)和辣根过氧化酶(horseradish 制成双酶传感器。该传感器检测多元酚时具有较高的灵敏度和较低的检测限。由于大 肠杆菌在含水杨酸的培养液中代谢时能够产生多元酚【5’6】(主要为2，5．二羟基苯甲酸， 2,5-dihydroxybenzoic 因此，我们以双酶传感器为工作电极，采用计时电流法实现了对大肠杆菌的快速计数， 所花时间仅需要3h． 结果与讨论 l双酶传感器的AFM形貌表征及其电化学伏安行为 1．APTESmodified Fig electrode(a)andbienzTmebiosensor(b)． 少量的纳米团聚物。图1(b)显示通过戊二醛已经将多元酚氧化酶和辣根过氧化酶 键合在电极表面。所以，通过APTES分子自组装，可以成功将多元酚氧化酶和辣 根过氧化酶分子固定在ITO电极表面制成双酶传感器。 of at Fig2．Cyclicvoitammograms polyphenoliccompounds the ITO HRPmodified electrode(a)，the laccasemodified the electrode(C)andbiosensor(d) bienzyme ina pH6．0 disodium buffer 2,5一DHBA(5．O×10‘6 solution(PCBS)，containingmol·L-I)． 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传感器与生物分析化学 由图2可见，此双酶传感器在．0．05V对多元酚具有较明显的还原电流，且比单 酶修饰电极对多元酚的响应电流更高。 2双酶传感器对大肠杆菌的计数 将大肠杆菌在含水杨酸的培养基中培养2．5h，以计时电流法快速计数菌液中大 肠杆菌的数量。在磷酸．柠檬酸缓冲溶液(PCBS)中，工作电极的电压设定为．0．05V， 测定每次加入大肠杆菌溶液而产生的电流变化值。图3显示了每次加入100此大肠 104 杆菌溶液(浓度为1．0Xcells／mL)后，工作电极上获得的电流变化，且电流变 化与大肠杆菌浓度成正比。本文研究的双酶传感器方法能够检测大肠杆菌的浓度范 7