基于碳纳米角的肿瘤细胞表面聚糖表达模式的无标记阻抗分析.pdfVIP

第十届全国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器与生物电化学分析 D63基于碳纳米角的肿瘤细胞表面聚糖表达模 无标记阻抗分析‘ 丁霖，王晓剑，程伟，雷建平，鞠幌先+ (南京大学化学化工学院，生命分析化学教育部重点实验室，南京210093 摘要：本文利用阻抗技术发展了一种全新的无标记检测肿瘤细胞(K562)表面聚糖的电化学方 法。利用稳定固定在电极表面的带羧基的碳纳米角，将可选择性识别细胞表面聚糖的凝集素固定 在电极表面。通过测量凝集素修饰电极结合细胞后的阻抗值，测定电极表面结合的细胞。比较不 同种类的凝集素修饰电极与细胞温育后的电子传递阻抗值，可以得到细胞表面各种聚糖结构的表 达。 关键词：碳纳米角，聚糖，凝集素，K562白血细胞，电化学阻抗谱 前言 近20年来，糖生物学在糖链结构、生物合成、生理功能以及疾病诊断等方面的研究取得了 极大的进展，已有证据表明糖链参与几乎所有真核生物的每一生命过程，起特异性的识别和介导 作用【l】。但是，由于缺乏理想的检测方法和手段，糖生物学研究的发展严重滞后于对蛋白质、核 酸的研究。最近，基于凝集素阵列的方法引起了研究者的广泛注意，但是这类方法需预先对细胞 样品进行荧光标记，影响了细胞本身生理活性，而且人部分这类方法需在成像前对样品进行干燥 处理【21。所以，发展原位快速检测细胞表面聚糖表达的无需标记的方法对于这个领域具有突出重 要性【3，4】。本文利用阻抗技术发展了一种全新的无标记原位检测K562肿瘤细胞表面聚糖的电化学 方法。该方法将纳米材料特殊的结构特征、优异的电性质和凝集素的识别结合，无需使用价格昂 贵的标记抗体或凝集素【5】，为细胞表面聚糖表达研究提供了一个新思路。 实验部分 Aldrich lnc(USA)。单壁碳纳米角(SWNHs)获赠于SumioIijima研究组。所有溶液均用MilliQ 超纯水配制。 mM mM7．4 仪器阻抗检测采用传统三电极系统，于含10 K4Fe(CN)6／K3Fe(CN)6的10pH Hz，正弦波电压 作电极，铂丝为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，阻抗检测范围是0．05—106 的增幅为5mV。 表面，干燥器中晾干，制得酸化碳纳米角修饰电极(Ox．s、州Hs／GCE)。滴加8斗l含凝集素(优 化浓度)和EDC(2．5 h后，PBS淋洗电 mg／mL)的混合溶液于Ox-SWNHs／GCE，25。C反应3 7．4Tris．HCI溶液丁电极表面，30min后用PBS淋洗电极，得 极。滴加12“L含1％BSA的pH SWNHs／GCE上，25 oC温育l ox．S、VNHs／GCE)。 结果讨论 利用可以稳定固定在电极表面的带羧基的碳纳米角，通过EDC交联，将可以选择性识别细 388 第十届全国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器}j生物电化学分析 胞表面聚糖的凝集素同定在电极表面。碳纳米角具有人量暴露在外的带羧基的尖端，可以有效连 接凝集索，并保持其生物活性。同时，由于碳纳米角优良的促进电子传递的能力，人大降低了背 景阻抗值，提高了检测的灵敏度。凝集素作为特异性识别糖基结构的蛋白质，不仅可以识别不同 种类的单糖，还可以区分组成相同而结构不同的糖位点。凝集素修饰电极在细胞溶液中温育后， 子，导致电极的电子传递阻抗增加(图1)。细胞表面不同种类、结构的糖基表达的量不同，所以 不同种类的凝集素修饰电极表面能结合的细胞量也不同。通过比较其电子传递阻抗值，可以得到 细胞表面不同组成、结构的糖基表达程度高低的信息。由图2可以看出，细胞表面能与DBA结 合的糖位点(乙酰半乳糖胺)明显少于其它三种凝集素，按照从大到小关系排列为WGA，ConA， PNA，DBA，与文献报道相一致(图2)。