基于选择性组分监测的地黄炮制过程HPLC分析.pdfVIP

基于选择性组分监测的地黄炮制过程HPLC分析 王国庆1p，董春红3商玉宽2孙雨安1，赵雷1，丁青竹1 大学怀药工程研究中心焦作454003；Email：四型璺丛g@兰垫!i：鲤坚：蛆 地黄为玄参科植物地黄(RehmanniaglutinosaLibosch)的新鲜或干燥块根，具清热凉血、养阴、 生津之功效，是常用中药品种之一。怀地黄为河南焦作一带生产的道地药材，其中环烯醚萜、单萜及 其苷类等活性组分含量较多…。在对地黄的品质进行研究时，多以梓醇作为检测对象‘舶。梓醇是一种 环烯醚萜单糖苷，为地黄的主要有效成分之一，具有降血糖、利尿、缓泻等药理活性13I。梓醇等环 烯醚菇普类化合物结构近似，极性较大，而且化学稳定性较差14l，因而分离纯化难度较大。生地黄 经炮制加工成熟地黄，具滋阴补血，益精填髓之功效f5I，梓醇含量极低或者不含j因此，通过选择性 提取地黄样品中的梓醇，并测定其在炮制过程中含量的变化，能够为科学判断地黄炮制终点提供依 据，从而避免仅靠个人的感官分析可能会产生因人而异的炮制终点判断。本文以甲醇为提取剂提取 地黄样品中的梓醇等组分，通过HPLC分析测定其中梓醇的含量，以梓醇含量变化趋势判断地黄炮 制终点。该法用于不同品质生地黄加工炮制熟地黄过程分析，能够得到与专家人工感官分析类似的 结果，可望作为为地黄炮制过程监控与终点确定的新方法。 l实验部分 1．1试验材料 生地黄购自河南省焦作市武陟，为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosaLibosch)的干燥块 根，根据人工分级分为一级品、二级品、三级品和四级品等4个品质级别。试验中所试剂正丁醇、甲 醇等为分析纯。 1．2地黄的炮制及其组分选择性提取 参照中国药典一部附录--D蒸发炮制，取生地黄样品适量，洗净，闷润24h，水蒸24h。炮制过 程中，前15h每o．5h取样1次，15h后每1h取样1次。在烘箱内低温50C烘干至恒重，粉碎。取29干 地黄放入50mL烧杯中，加水20mL超声提取1h，抽滤，收集滤液，用等体积正丁醇分5次萃取，混 合有机相，用旋转蒸发仪在80C下旋转蒸干，再用2mL甲醇溶解，加乙酸铅离心除蛋白，取上层清 液经0．45 pm滤膜过滤后进样。 1．3地黄炮制过程HPLC监控分析 HP 波长设定为210nm，流速为0．1mL／min；进样量为10|lL． 2结果讨论 2．1不同品质生地黄中梓醇相对含量比较 对不同品质级别的生地黄相同的样品预方法进行处理，HPLC分析时设定相同的进样量，则梓 135 醇所对应的峰高或峰面积可以直接作为不同品质样品梓醇的相对含量的比较。图1为4种品质地黄 中梓醇峰的面积，可以看出随着地黄品质的降低，其中梓醇的含量下降，人工分级的地黄的药效与 通过梓醇活性组分含量定量测定结果相符合。 2．2炮黄炮制过程梓醇的变化 图2为二级品生地黄炮制为熟地黄过程中梓醇峰面积随炮制时间的变化趋势图。可以看出，随 着炮制过程的进行，梓醇含量呈逐渐下降的趋势，并且至12．5h趋于稳定，可以作为地黄炮制终点。 o． 25xi 2“1o． 1孰1o． 要 10xlo． 50al矿 00 2 3 4 O 5 O 15 ∞ Grad． ruvm／h 图1不同级别生地黄梓醇含量对比 图2二级品炮制过程梓醇峰面积变化趋势 从图2还可以看出，梓醇的含量是呈波动下降的趋势，这应该是由于同一品质的地黄样品不同 块根之间组成并不完全均匀一致赞成的；另外，这种波动范围不大，说明根据地黄形状、色泽、部 位等感官分析的人工分级有其科学性的一面。 考察不同品质地黄在炮制过程中能得到类似的结果，即梓醇的含量均呈下降趋势并达到稳定 (未检出)，但不同品质地黄炮制的终点会有小幅度的变化。该结果与基于地黄炮制过程光谱测定数 据处理结果相吻合