第16章-分子流行病学探究.ppt

效应指标 一般以最早期生物效应标志作为探索暴露因素的致病作用或干预措施的短期效果评价指标，如抗体产生、代谢异常、基因表达异常等 选择结构和功能改变作为确定暴露的致病作用和早期诊断、早期预防的指标 临床诊断标志作为干预措施长期效果评价或预后的指标 标本采集 生物标本 一般包括病原的和人体的生物标本。常用的有：微生物标本、血液（血清）标本、组织标本、其他生物标本（如唾液、胃液、尿液、精液、头发、媒介生物等） 生物标本库 通常将储存有一种类型或多种类型生物标本，并能保持它们的生物活性以供研究之用的系统称为生物标本库(biological specimen bank, BSB)，如血清库、组织库、病原生物库等。 生物标本采集和储存 分子流行病学研究成功的关键 要求 在采集和储存过程中不能受到“污染” 储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果 所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识 现场调查研究方法 一般需要的样本量相对较小 不宜作大规模现场调查研究 分子流行病学在横断面研究中多是小样本抽样调查，在分析性研究中多为病例对照研究、队列与病例对照结合的巢式病例对照研究、病例-病例研究等，在实验性研究也多采用小样本随机对照试验。 实验室检测技术 核酸技术 核酸电泳图谱 核酸酶切电泳图谱 核酸分子杂交 核酸体外扩增 核酸序列分析 蛋白质技术 凝胶电泳、蛋白转印杂交、蛋白质测序 酶学技术 多位点酶电泳法 生物芯片技术 基因芯片 其他技术 免疫学技术 如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光免疫试验(FIA) 等；色谱技术 如高效液相色谱技术(HPLC)等 研究设计 研究目的 充分考虑创新性、实用性、可行性 测量指标 生物标志是否特异、稳定，标本采集是否方便，是否有灵敏而特异的检测方法 测量方法 简便、成熟，灵敏度和特异度高 调查方法与样本 样本有代表性，适量 结果与分析 设计中要预测研究结果，并根据选择的测量指标和测量方法确定资料分析方法 质量控制 注重现场质量控制的同时，特别重视实验室的质量控制 注意事项 预实验 资料分析 传统流行病学分析 生物标志发生率、检出率 血清流行病学分析 抗体的几何平均滴度、阳 转率、感染率等 遗传多态性分析 等位基因频率、遗传多态 度、杂合度等 遗传关系分析 基因型、克隆、克隆群 基因型(genotype)：具有相同遗传结构的一类生物体。 克隆(clone)：广义 许多生物特征（表型或基因型）相同的生物体，虽然分离来源、地区、时间可能不同，但它们的这些特征几乎只能解释为共同来源，则这些生物体称为一个克隆。狭义 一个生物体的无性繁殖群体，称为一个克隆。 克隆群(clone cluster)：遗传关系非常紧密的多个生物克隆，可以划分为一个克隆群。 实例一 研究题目 波兰某工业区环境中芳香族化合物暴露人群的DNA加合物研究 测量指标 DNA加合物/淋巴细胞DNA（介质） 测量方法 采集血液淋巴细胞，应用荧光检测竞争ELISA法和DNA加合物32P后标记技术。 研究设计 采用横断面分析研究；选择煤焦油作业工人为暴露组，当地城市居民和近郊农民分别为对照组。排除年龄、吸烟、其他职业暴露等因素的影响；比较3组DNA加合物水平。 结果分析 结果：当地城市居民（19例）与煤焦油作业工人（63例）的DNA加合物水平相似，而近郊农民（15例）的DNA加合物水平与煤焦油作业工人相比,仅为后者的二分之一或三分之一。结论：环境中芳香族化合物（煤焦油）暴露可导致体内DNA加合物水平升高。 质量控制 每份标本都同时在2个不同实验室进行检测。结果具有很好的一致性(r=0.66, p0.01)。 实例二 研究题目 应用HBV-DNA序列多态性研究HBV的传播 测量标志 第2551-2650位点核酸序列/血清HBV-DNA（介质） 测量方法 ELISA法和PCR法 研究设计 类病例对照研究：96名HBeAg阳性儿童和用ELISA检测HBV血清阳性的97名父母；假设该位点核酸序列在儿童与父母之间分配是随机的。 结果分析 结果：该序列在儿童和父母之间是非随机分配的（P0.00005);结论：HBV具有家庭内传播。 质量控制 关于家庭成员之间1%的序列差异的解释。排除了PCR错配可能。 实例三 研究目的 应用PCR测序追踪HIV传染源 测量指标 HIV/外周血单核细胞（介质） 测量方法 PCR和核酸