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导电共聚物尿酸酶传感器的制备及表征 篮盛景国林，阚锦睛+ (扬州大学化学化工学院，225002) 酶作为一种分析试剂日益被广泛使用，相应地，酶传感器成为越来越重要的分析工 具。由于酶传感器具有催化专一性、灵敏度高，轻便、耗时少和费用低等优点，从而在 食品、医学、环境检测等领域发挥着越来越大的作用…。自从Clark等在1962年“1用固 定化酶第一次制得酶电极以来，大量文献报道了固定酶的材料和方法。 由于固定酶的材 料和方法影响传感器中酶的活性和稳定性，所以探索固定酶的新材料和新方法有重要的 理论意义和实用价值“1。 随着导电高聚物的出现，用导电高聚物固定酶构成生物传感器一度引起人们的广泛 重视。用导电高聚物固定酶，酶催化反应过程中的电子得失可通过导电高聚物直接实现 电荷的传递。由于聚苯胺具有高电导率，较好的氧化还原可逆性，独特的搀杂性，在溶液和 空气中有较好的稳定性，所以被研究的较多。但聚苯胺的电导率，能量密度，催化活性和能 量转化受pH值影响较大。当pH值大于4时聚苯胺电导率和电化学活性较小，在酶的催化 反应过程中影响电子传递。苯胺和邻氨基苯酚麸聚物不但有较好电化学活性而且在pH 低于9．6时有较广泛使用电位”。。因为自由尿酸酶的最佳pH值为9，25，所以此共聚物较 适合于固定尿酸酶。 用导电高聚物固定酶以构成导电高聚物生物传感器的电化学方法主要有～步法” 和“两步法”。所谓“一步法”指的是将酶直接溶于导电高聚物的单体溶液中，在聚合的过 程中直接将酶包埋于高聚物中，“一步法”具有简单、价廉的优点，但单体和聚合时所用 介质常影响酶的活性。而“两步法”是先在电极上合成导电高聚物膜，再根据导电高聚 物的掺杂和去掺杂的性质，在温和的条件下将偏离等电点的酶分子在导电高聚物电化学 氧化还原过程中掺杂进高聚物中。这样可避免形成生物传感器过程中因激烈的反应而影 响酶的活性。然而，“两步法”固定酶受导高电聚物粒子间距离的影响，对粒子间距小于 酶分子粒径的导电高聚物，酶分子只能附着在导电高聚物的表面，这导致在测试过程中 酶很容易从导电高聚物膜表面脱附，使酶传感器的稳定性受到明显影响。 本文采用“模板法”制备的共聚物尿酸酶传感器”1，这种方法是先采用“一步法”制 各酶电极，接着将该电极在6．0mol dm。盐酸溶液中回流24小时，使包埋在电极中的酶充 分水解，从共聚物膜中脱离并留下一定的孔隙，这样就获得固定酶的模板。然后用“两步 法”将活性酶固定进共聚物模板中。 我们研究了电位、pH、底物浓度、温度对传感器响应电流的影响，并将循环伏安图 、紫外光谱、红外光谱以及扫描电镜用于传感器的表征。实验结果表明：共聚物尿酸酶 传感器具有较好的操作稳定性和重现性。在0．15—0．65 V，传感器响应电流随电位增大 而增大。鉴于响应时间随电位增大而降低，当电位大于0．4 V时响应时间少于10秒，难以 精确读数，但当电位设置较低时响应电流太小，测量范围太窄。实验中的测量电位设置为 ‘电话：0514-7975590转9415 9l 0．4V。传感器响应电流与pH值关系如Fig．1，在pH值3．0-6．0范围内，响应电流随pH 值增大而增大，虽然共聚物的电导率降低但在此pH值范围内酶的活性随pH值增加而增加 是主要的。在pH值6．5-8．5范围内，响应电流随pH值增大而降低，在此pH值范围内共 聚物的电导率降低是主要的。在pH值8．5-11．0范围内，响应电流随pH值增大而增大，因 1200 0 200400600跏1000 盯!ttnS／ramol uficase of