电化学发光检测技术原理概要.pptx

Elecsys Principle 电化学发光检测原理及要点解读 标记免疫技术的发展 电化学发光检测原理 电化学发光的技术特点 校准概念及溯源性 校准报警分析 常见数据报警分析 试剂特性解读 检测菜单介绍 主要内容 放免 酶免 荧光免疫 化学发光 电化学发光 1960‘S 1970~80‘S 2000‘S 1，抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2，从手工操作向全自动分析仪的转变 3，从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变 标记免疫技术的发展 缺点 半衰期短，试剂货架期短 标记物不稳定 每次需做标准曲线 反应时间长，不易自动化检测 使用放射性核素，需要一定防护 优点 分子量小,免疫损耗小 简便、灵敏、特异 可自行设计试剂盒 应用范围广 标记物: 碘125 标记免疫技术的发展－放射免疫测定法(RIA) 底物: 无需底物 优势 灵敏度较高 试剂稳定 较快的速度 无污染 缺点 包被表面积小（灵敏度和速度） 包被均一性不足（精密度） 检测技术多为颜色反应（特异性和灵敏度） 反应时间不一致,造成结果的偏差(特别在手工操作时) 标记免疫技术的发展－酶联免疫测定法(ELISA) 标记物: HRP 辣根过氧化物酶/ALP 碱性磷酸酶 底物:TMB四甲基联苯胺/对硝基苯磷酸酯P-NPP 优势 灵敏度较高 成本较低 荧光检测信号 操作简便 缺点 传统的微板吸附包被技术 均一性差、 重复性差 批量检测不能实现全自动 每次检测需要做定标曲线， 浪费成本 样本的前处理技术操作过程完全同ELISA方法 标记免疫技术的发展－时间分辨荧光免疫(TRFIA) 标记物：铕(Eu3+)、钐(Sm3+)等镧系元素 底物: 镧系元素螯合物 标记物： ALP 碱性磷酸酶 底物：MUP（4甲基伞形酮酰磷酸 ） 激发物：光 最终检测信号：荧光强度 代表产品： 美国Abbott AXSYM 法国bioMérieux VIDAS 标记免疫技术的发展－酶荧光免疫测定法(MEIA) 标记物：HRP 辣根过氧化物酶/ALP 碱性磷酸酶 发光底物：鲁米洛、金刚烷 激发物：特定的化学环境 最终检测信号：可见光强度 代表产品： 美国JJ Ortho Vitros Eci 美国BeckmanCoulter Access,Dxi800 标记免疫技术的发展－酶促化学发光免疫(CLIA) 标记物：吖啶酯,吖啶酯衍生物 发光底物：无需底物,标记物直接发光 激发物：特定的化学环境 最终检测信号：可见光强度 代表产品： 德国SIEMENS Centaur XP 美国Abbott I2000 标记免疫技术的发展－直接化学发光(CLIA) 标记物：三联吡啶钌 发光底物：三丙胺 激发物：直流电场 最终检测信号：可见光强度 代表产品： 罗氏公司 e411,E170,e601,e602 标记免疫技术的发展－电化学发光(ECLIA) 标记免疫技术的发展 电化学发光检测原理 电化学发光的技术特点 校准概念及溯源性 校准报警分析 常见数据报警分析 试剂特性解读 检测菜单介绍 主要内容 电化学发光免疫检测原理-名称的由来 ELECTRO 电 CHEMI 化学 LUMINESCENCE 发光 I MMUNO 免疫 ASSAY 分析 电化学发光免疫测定系统 Elecsys? 电化学发光免疫检测原理-技术特点 专利的电化学发光技术 标记物：三联吡啶 Ru(bpy) 32+ 递电子体：三丙胺 TPA 反应启动方式: 直流电场 电化学发光免疫检测原理--电化学发光 里程碑式的标记物：三联吡啶钌 水溶性，分子量小 结构稳定，免疫损伤小,易于标记 应用广泛（激素，DNA等） 与三丙胺(Tripropylamine,TPA) 共同构成电化学发光系统 三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+ + NHS (N羟基琥珀酰胺酯) 电化学发光免疫检测原理--标记物 电极表面的电化学发光反应 电化学发光免疫检测原理--电化学发光的反应过程 发光标记物: 三联吡啶钌 Ru(bpy) 32+ 三联吡啶钌 “催化” 三丙胺 发出可见光 反应产物: 三丙胺自由基(TPA*) + 620nm的光子 发光底物: 三丙胺(TPA) 电化学发光启动条件: 直流电场 反应特点: 迅速,可控,循环发光 CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 CH2CH2CH3 CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 失e- CH2CH2CH3 CH3CH2CH2-N-C