第四章 生物化学与分子生物学技术实践 课件 苏教版选修一.pptVIP

1.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是( ) A．若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则分子丙也一定在沉淀中 B．若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快 C．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋内，则分子乙也一定保留在袋内 D．若用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远 * 第四章 生物化学与分子生物学技术实践 一、蛋白质的分离与纯化 1.实验原理 依据蛋白质的不同特性，将不同种类蛋白质分开，再依据_____ _______________________________的差异进行纯化。 质之间以及蛋白质与其他物质之间 蛋白 2.步骤 【点拨】(1)蛋白质与蛋白质、蛋白质与其他物质之间的差异主要表现在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性质等方面。 (2)电泳时，带电的颗粒向与其电性相反的电极方向移动。 二、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 1.原理 不同的物质在同一电场中的__________不同，泳动速度主要取 决于__________________。一般来说，带电颗粒直径______， 越接近于球形，所带净电荷_______，在电场中的泳动速度越 快。 2.步骤 配制试剂→架滤纸桥→浸泡薄膜→__________→平悬薄膜→ __________→染色→漂洗→________ 泳动速度 带电颗粒的性质 越多 越小 细心点样 脱色 实施电泳 【点拨】(1)醋酸纤维薄膜上的缓冲液有利于维持蛋白质的正常形态和电泳时蛋白质分子的泳动，在吸取薄膜表面的缓冲液时不宜吸得太干。 (2)点样的整齐与否直接影响电泳结果蛋白质条带的区分。 三、PCR扩增DNA的过程 1.参与的组分及作用 ____________________________ Mg2+ 使Taq聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 ________ ___________________ Taq聚合酶 合成子链的原料 ______________ ____________________ 模板DNA 在DNA扩增中的作用 参与的组分 提供DNA聚合反应的离子条件 催化合成DNA子链 4种脱氧核苷酸 提供DNA扩增的模板 引物 2.PCR扩增过程 变性：________________________________ ↓ 退火：_______________________________________________ ↓ _________________________ _____：72 ℃左右→在Taq聚合酶作用下，4种脱氧核苷酸按碱基互补配对原则合成新DNA双链 94 ℃→双链DNA解旋成单链DNA 40 ℃～ 60 ℃→引物与作为模板的单链DNA特定 部位相互配对、结合 延伸 【点拨】解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开，而DNA聚合酶和DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键。 蛋白质的分离与纯化方法的比较 是否需要缓冲液 分离 结果 电泳法 原理 离心沉降法 透析法 方法 项目 不同带电颗粒在同一电场中的泳动速度不同 控制离心速率，使分子大小、密度不同的蛋白质沉降分层 蛋白质分子不能透过半透膜 需要 不需要 需要 将蛋白质分离开来 将蛋白质沉降分层 将蛋白质和小分子化合物分开 【高考警示钟】 提取蛋白质后，只采用一种方法可能无法将蛋白质纯化，可以采用多种分离与纯化方法结合使用的措施将蛋白质进行分离、纯化。 【典例训练1】(2010·江苏高考)某种蛋白酶是由129个氨基酸脱水缩合形成的蛋白质。下列叙述正确的是( ) A.该蛋白酶分子结构中至少含有129个氨基和129个羧基 B.该蛋白酶溶液与双缩脲试剂发生作用产生紫色反应 C.利用透析法纯化该蛋白酶时，应以蒸馏水作为透析液 D.用含该蛋白酶的洗衣粉去除油渍，效果比其他类型加酶洗衣粉好 【解题指南】 1.考查实质：本题考查蛋白酶的化学本质、组成、结构及鉴定等。 2.解题关键：(1)缓冲液能保持蛋白质的活性；(2)蛋白酶的本质是蛋白质，具有专一性，只能水解蛋白质。 【解析】选B。该蛋白酶只有一条链时，所含有的氨基和羧基数目最少，都至少含有一个，Ａ项错误。因其本质为蛋白质，故可与双缩脲试剂发生作用产生紫色反应，Ｂ项正确。用透析法纯化蛋白酶时，应用缓冲液做透析液以保持蛋白酶的活性，C项错误。因酶具有专一性，油渍为脂肪，故利用含蛋白酶的洗衣粉去油渍比用含脂肪酶的效果差。 【互动探究】(1)用离心沉降法分离该蛋白酶和其水解产物的混合物时，该蛋白酶沉降在离心管的哪一部位？ 提示：沉降在离心管的底部。该蛋白酶