利用PCR-DGGE技术指导高温油藏中功能微生物的分离.pdfVIP

第29卷第2期 Vo1．29，No．2 2008年2月 环 境 科 学 ENVIRONMEN I’AL SCIENCE Feb．，2008 利用PCR．DGGE技术指导高泪Inn ilXl 同 藏中功能微生物的 分离 王君，马挺，刘静，刘清坤，赵玲侠，梁凤来，刘如林 (南开大学生命科学学院天津市功能基因组学重点实验室，天津 300071) 摘要：采用PCR—DGGE技术对高温油藏的微生物群落进行了多样性分析，并将得到的信息用于指导油藏微生物的分离．本研究 通过PCR—DGGE技术对油藏水样中DNA的16S rDNA V3、V8、V9 3个高可变区的扩增产物进行了比较，确定采用可得到更多微 生物多样性信息的v9区引物进行PCR扩增，优势条带序列分析表明，在高温油藏中存在的微生物与GenBank数据库中a，口， ，，一变形杆菌和芽孢杆菌的序列相似性最高．利用多元细菌培养技术，以序列信息为指导，采用富集培养、直接培养和特殊培养 的方法，从水样中分离出5株高温菌(而传统分离方法只能获得3株)，其中3株高温解烃菌分别属于 Bacillus属、Geobncillus属 和Petrobacter属，它们能够在55℃以上兼性厌氧条件良好生长，对原油的降解率分别为56．5％、70．01％和31．87％，对原油的降 粘率分别为4o％、54．55％和29．09％，使原油的凝固点分别降低3．7、5．2和3．1 oC．因此，序列指导和改变培养条件是分离更 多有效采油微生物的改进方法，这3株高温菌的对原油的作用效果证明其具备提高石油采收率的潜力． 关键词：油藏；梯度凝胶变性电泳(DGGE)；16S rDNA；高温解烃菌；培养技术 中图分类号：X172；Q938．1 文献标识码：A 文章编号：0250-3301(2008)02—0462．07 Isolation of Functional Bacteria Guided by PCR—DGGE Technology from High Temperature Petroleum Reservoirs WANG Jun，MA Ting，LIU Jing，LIU Qing-kun，ZHAO Ling-xia，LIANG Feng-lai，LIU Ru-lin (Tianjin Key Laboratory of Microbial Functional Genomics，College of Life Sciences，Nankai University，Tianjin 300071，China) Abstract：It is a brand—new method to isolate functional bacteria from high temperature petroleum reservoirs according to the sequence information obtained from PCR—DGGE patterns．Three—set primers of 16S rDNA high variable region，V3，V8，V9，were compared．The resuhs showed that more microbial diversity information could be obtained from the PCR product of V9 region．Sequence analysis indicated that the dominant bacteria in the petroleum reservoir had high sequence similarity with bacteria from a，口，7-Proteobacterias and Bacilli from the GenBank database．According to the sequences information，multi—cultivation technology including enrichment cult