枸杞多糖检测法方研究.ppt

枸杞多糖检测方法研究 姓名：王畅 2010-8-5 内容提要 枸杞多糖简介 来源：茄科植物枸杞的干燥果实 枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide） 简称LBP，是以阿拉伯糖、 鼠李糖、 木糖、 甘露糖、 半 乳糖、 葡萄糖与半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖同多肽或蛋白 质构成的复合多糖为主,还含有中性杂多糖和葡聚糖同多肽或 蛋白质构成的复合多糖，是天然的大分子物质。 理化性质（一） 理化性质（二） 溶解性 1.溶于水，二甲基亚砜，溶解度随中性单糖含量的减少而降低 2.不溶于高浓度乙醇，乙醚，丙酮，氯仿，正丁醇等有机溶剂 理化性质（三） 选题背景（一） 生理活性：增强免疫、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血糖血脂、保肝，可作为第三代功能性食品的功能因子 随着生活水平的提高，由以治病为主向防病为主的观念转变，为功能食品的开发带来了良好机遇。功效明确的枸杞多糖符合新一代功能食品的要求，枸杞多糖的研究将推动枸杞产品向更高层次发展 保健食品的区分 第一代保健食品：以民间的处方，秘方为基础，根据原材料的功能推断保健品的功能，未经严格的科学检测的保健食品 第二代保健食品：经过动物实验和人体实验证明产品具有某项生理调节功能，其安全性，功能性都较为可靠 第三代保健食品：经过进一步的严格实验及审核，除具备第二代产品的要求外，还要明确功能能因子及其结构，含量，作用机理，类似于药品的要求 选题背景（二） 蒽酮-硫酸法 选题背景（三） 质量不易控制 枸杞多糖是一个水溶性的大分子物质, 不能如小分子物质那样, 通过熔点测定、 元素分析, 四大光谱等鉴定后, 制定质量标准。 分子量测定 决定了枸杞多糖的生物活性，分子量过大不易透过细胞膜，影响活性，分子量小一般是没有活性的，因此分子量数据可以作为枸杞多糖质量标准的重要指标。 多糖的单糖组成分析 是进行多糖质量控制和获取多糖基本信息的重要环节。单糖组分及其摩尔比可以作为质量标准的重要指标。 分子量测定 高分子物质的分子量测定有渗透压法、 蒸气压法, 凝胶色谱法、 超速离心法等，但已有的报导大多集中在有机溶剂体系的高分子聚合物如各种塑料产品、人工橡胶等，水体系大分子物质如蛋白质、多糖的分子量测定很少报导 单糖组成测定 方法主要有TLC、GC 、HPLC、 CE等,但是关于枸杞多糖柱前衍生化高效液相色谱法测单糖组成还未见报道。 研究目的 建立一个枸杞多糖的质量标准—定量鉴别方法 ： (1)通过HPLC法测定枸杞多糖的分子量 (2)通过柱前衍生化高效液相色谱法测定枸杞多糖的单糖组成及其摩尔比 在多糖的分子量测定方法、尤其是枸杞多糖的测定方法尚未确立标准，无据可依的情况下，继承传统保健理论的同时结合现代科学检测技术，找出枸杞多糖的最优检测方法，制订枸杞多糖的检测标准，为以后的枸杞多糖检测提炼提供依据。 研究动态 分子量的测定方法 凝胶过滤法 将已知分子量的葡聚糖标准品进行凝胶层系，洗脱收集，用硫酸-蒽酮法检测多糖，分别求得相应的洗脱体积Ve 用蓝色葡聚糖上柱求得外水体积Vo.以Ve/Vo为纵坐标，lgMr为横坐标，得到分子量的标准曲线。 3.取枸杞多糖进行一样的操作求得Ve/Vo查标准曲线可求得多糖的分子量 多糖中单糖的组成及其摩尔比的测定方法 组成成分 单糖： 阿拉伯糖，鼠李糖，木糖，甘露糖，半乳糖，葡萄糖 半乳糖醛酸---硫酸-半胱氨酸反应定性 蛋白质---斐林-酚法 枸杞多糖中单糖的组成及其摩尔比 枸杞多糖常见官能团红外光谱解析 发展趋势 1) 枸杞多糖结构与活性、功能的关系方面得到明确，市场上将有更多以枸杞多糖为主要成分的新药，并且都是采用现代生物技术，从分子、细胞、器官等分子生物水平上研究活性因子的结构、含量及其作用机理，准确评价其功效。 2）因为有统一的质量标准，明确的结构证明其新颖性，创新性，实用性，中国除了主要围绕枸杞多糖的提取方法、纯化工艺、分离技术、制备治疗脂肪肝胃溃疡药物应用等专利以外，还将得到更多关于枸杞多糖的组分结构、作用机制、药理功效等方面的专利。 拟采取的研究方法及可行性分析 (1)通过HPLC法测定枸杞多糖的分子量 可行性分析：严邦干曾采用此法测定香菇多糖的分子量，该方法较其他多糖测定法具有迅速，简便，准确的特点，是目前较为行之有效的测定方法. (2)通过柱前衍生化高效液相色谱法测定枸杞多糖的单糖组成及其摩尔比 可行性分析：采用 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉酮(PMP)在碱性条件下与单糖定量缩合生成单糖PMP 衍生物,用常规的紫外检测器和 C18烷基键合柱 ,建立适于多糖单糖组成测定的 HPLC新方法 ,达到灵敏、快速、准确、方便和可在线大批量分析的目标。 HPLC