2.3分解纤维素的微生物的分离2讲义.pptVIP

* 纤维素： 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物； 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布植物的根、茎、叶中； * 1、在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。 2、农作物秸秆：米秸、麦秸、稻草、草、木屑等富含大量的纤维素，被利用的机会很少、效率低； 纤维素生物燃料：最有希望替代石油能源 科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物、木材及生长更为迅速的草本植物，转化为种类繁多的生物燃料（甚至是航空燃油）。 * 教学目标: 1、知道纤维素酶的种类及作用 2、初步掌握从土壤中分离出分解纤维素的微生物的实验方法 3、说出刚果红染色法及其原理 * （一）纤维素与纤维素酶 1.纤维素（高分子多糖类物质） 基本单位：葡萄糖 土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用。 * 2.纤维素酶 纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括 ，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 萄葡糖苷酶 葡萄糖 纤维素 复合酶 C1酶、 、葡萄糖苷酶 CX酶 * 右边试管中添加纤维素酶， 左边试管不添加纤维素酶； 〖思考1〗实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？ * （二）纤维素分解菌的筛选 1、筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。 刚果红染色法 颜色 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后， 刚果红-纤维素红色复合物无法形成，出现以_____________为中心的________，可以通过___________________________来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 * 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 * 思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。 * (三) 实验设计 p28 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 挑选什么样的菌落? ①鉴别培养基的特点? ②如何鉴别? 根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找； 目的：增加纤维素分解菌的浓度。特点：加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。 特点：在培养基中加入某种指示剂或化学药品。鉴别方法：刚果红染色法 什么样的环境取样? ① 培养的目的? ②选择培养基的特点? * 挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 * 1、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因是__________ 【资料二】选择培养 阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题： 液体 没有添加琼脂 2、该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是____________________________________________________________________________ 具有 以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖； * 若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。 3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？ 葡萄糖 纤维素粉 * 培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5~10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 氢元素、氧元素 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) * 【资料三】刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 * 染色法 优点 缺点 方法一 方法二