2.3-动物细胞工程规范.ppt

动物的克隆繁殖 特别注意：动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。 动物细胞的全能性 特别注意：动物的受精卵和卵裂球含有2-8个细胞时，每个细胞都具有全能性。 32细胞 胚胎干细胞 桑椹胚 高等动物的胚胎发育 受精卵→二分裂球→四分裂球→八分裂球→桑椹胚→囊胚→原肠胚→组织和器官→幼体。 什么是细胞核移植？ 去核卵母细胞 重组细胞 核移植：将动物一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，形成重组细胞，并最终发育成一个新的动物个体。 早期胚胎 过程：去核（显微操作）→注核→形成重组细胞。 电脉冲刺激 实验结论：胚胎细胞核移植的成功率远高于体细胞核移植。 卵细胞 肠上皮细胞 囊胚 选择去核的卵细胞作为受体细胞的原因： ①体积较大，易操作。 ②含有供早期胚胎发育的营养物质。 ③含有促进细胞核全能性表达的物质。 绵羊多莉的克隆过程 1997年，苏格兰罗斯林 去核卵细胞 细胞核移植 胚胎移植 代孕母体 活动：用最简洁的语言总结多莉羊的诞生过程 动物细胞培养 核移植 胚胎移植 动物克隆成功的条件 （1）具有包含本物种完整基因组的细胞核的活细胞 如：乳腺上皮细胞。 （2）能有效调控细胞核发育的细胞质物质 如：去核卵细胞的细胞质。 （3）完成胚胎发育的必要的环境条件 如：诱导重组细胞生长、分化的实验条件和怀胎母体的子宫环境。 详见P-20 * 第二章 克隆技术 第二节 动物的克隆 动物细胞培养 动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 剪刀剪碎 动物细胞培养的过程 加培养液稀释 剪刀剪碎 原代培养：初次培养 动物胚胎或幼龄动物的组织 水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等 原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养。 用剪刀剪碎 胰蛋白酶消化 CO2培养箱中保温培养 O2是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的pH。 传代培养：分瓶后培养 传代培养：将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养。 营养物质枯竭，细胞密度过大，接触抑制 动物细胞的生长特性 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 贴壁生长 贴满瓶壁 停止生长 贴壁生长：悬浮液中分散的细胞贴附在培养瓶内壁才能生长。 无限传代 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂。 单层 什么是细胞系？ 细胞系：原代培养物经传代培养后所得到的一群不均一的细胞（异质性）。 ①连续细胞系：无限传代，不死性，遗传物质改变（发生转化），具有异倍体核型。 ②有限细胞系：二倍体细胞（2N）。 细胞系 分瓶 原代培养物 什么是细胞株？ 细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞群。 特点：①具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。②遗传物质未改变。 动物细胞体外培养的条件 ①无菌、无毒的环境。②营养物质。③温度和pH。④气体环境（O2和CO2） 分散成单个细胞 使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来 动物组织块 例题：用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （　）A. 容易产生各种变异 B. 具有更强的全能性 C. 取材十分方便 D. 分裂增殖的能力强 例题：动物细胞培养的特点（ ） ①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③细胞分化 ④接触抑制 ⑤减数分裂 ⑥原代培养一般传1-10代 A. ①②④⑥ B. ②③④⑤ C. ①③④⑥ D. ③④⑤⑥ 例题：下列为有关动物细胞培养的叙述，其中不正确的是（ ） A. 用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织 B. 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞 C. 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液 D. 动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞全部衰老死亡 动物细胞克隆 细胞克隆：又克隆培养法，把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体。 未经克隆化的细胞系具有异质性，经过克隆培养以后成为纯系（均一性）。 特点：来源于一个共同的祖细胞，遗传性状均一，表现的性状相似，便于研究。 原代培养细胞和有限细胞系克隆起来有实际困难，无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞系比较容易克隆。 例题：下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（ ） A. 培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞 B. 克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C. 二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D. 恶性细胞系的细胞可进行传代培养 例题：（20