医学微生物实验室菌种的保存和保管.pdfVIP

海南医学院学报 2006．12(1)：57—58 Journal ofHMnan Medical College 57 医学微生物实验室菌种的保存和保管 王 英，李文广，周贞鉴，詹志农 (海南医学院微生物学免疫学实验室，海南 海口 571101) 【摘要】目的：探讨实验室常用茵(毒)种的保存方法和安全管理措施。方法：根据细菌的特性及营养 要求，选择适宜的培养基和培养方法。经生物学鉴定合格的菌种。根据需要选择适当的方法保存，并 指定专人负责保管和制定茵(毒)种安全管理制度。站杲：不同的方法保存茵(毒)种，保存时间不一 样。培论：实验室可根据实际需要选择最佳的保存法，指定专人保管茵(毒)种并制定安全管理制度， 保证茵(毒)种质量和安全。 [关键词】细菌；保存；实验室；院校，医学 [中图分类号】R372 [文献标识码】A [文章编号】1007-1237(2006)01-0057-02 医学院校的微生物实验室主要承担微生物实 菌种的保存中，我们根据不同的菌种选择最 验的教学任务及服务于科研，日常工作中经常要 适宜的保存方法。 分离、鉴定细菌，保存菌种。菌(毒)种是微生物实验 1．3．1 定期移植保存法 ①液体培养基低温保 的基本材料，其中大部分是病原微生物。妥善保存 存法：将保存营养要求不高的细菌接种于装有营 和保管菌种，不仅是实验教学和科研质量的重要 养肉汤的塑料管中，营养要求高的细菌接种于含 保证，更是保证生物安全，防止菌种播散的重要措 15％～20％血清的营养肉汤管中，经37℃培养 18~ 施。笔者所在实验室经过多年的实践，逐步实现了 24 h后。取出封口，置一7O℃冰箱保存。②半固体 菌种保存和保管的系统化、科学化。 穿刺保存法：将细菌穿刺接种于普通半固体培养 1 材料与方法 基内，37℃培养18~24 hA，在无菌条件下加入 1．1 教学实验室常用的菌毒种 灭菌液体石蜡，厚度约1 cm，封口，置4℃冰箱保 ①营养要求不高的菌种：金黄色葡萄球菌、大 存。③琼脂斜面保存法：营养要求不高的菌种用普 肠埃希菌、志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、变形杆菌、 通琼脂斜面保存法，营养要求高的菌种用血液琼 铜绿假单胞菌。②营养要求高的菌种：链球菌、肺 脂斜面保存法。将细菌蜿蜒接种于琼脂或血液琼 炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、白喉棒状 脂斜面上。置37℃培养18-24 h后，石蜡封口，置 杆菌。⑧厌氧芽胞杆菌：破伤风芽胞梭菌、产气荚 4℃冰箱保存。④吕氏血清斜面保存法：吕氏血清 膜梭菌；④需氧氧芽胞杆菌：枯草芽胞杆菌；⑤真 斜面培养基的成分为1％葡萄糖肉汤1份、无菌的 菌：白色念珠菌、新生隐球菌；⑥病毒：新城鸡瘟病 猪血清或兔血清3份和5％-10％的中性甘油，白 毒(NDV)。 喉杆菌在该培养基上生长旺盛，菌体形态典型，异 1．2 菌毒种的鉴定 染颗粒明显。将白喉棒状杆菌接种于吕氏血清斜 实验室中保存的菌(毒)种都要经过鉴定合格 面上，37℃培养18～24 h后，石蜡封口，置4℃冰 后方可使用。常用的鉴定方法有形态学观察、菌落 箱保存。⑤疱肉培养基保存法：疱肉培养基是将牛 特征、生化反应、血清学鉴定等。例如：肠道杆菌选 肉渣装于长试管中，约3 cm高，并加入肉汤至高 用的生化反应有五糖管发酵试验、靛基质试验、动 出肉渣1倍，经高压灭菌后即可。用于保存破伤风 力试验；葡萄球菌可选用触酶试验、血浆凝固酶试 梭菌等专性厌氧菌时，将破伤风梭菌接种于疱肉 验；新城鸡瘟病毒选用血凝、血抑试验等等。 培养基，置烛缸内，经37℃培养2-7 d待细菌充 1．3 菌毒种的保存 分形成芽胞后，挑选肉汤浑浊，肉渣部分变黑的培 【收稿日期】2o05一o4一l1 【作者简介】王英(1979一)，女，海南省屯昌县人，海南医学院微生物学免疫学实验室助理实验师．学士。 58 海南医