斑马鱼鳃弓部CYP1A1表达对二噁英类污染物质的生物学评价.pdf

持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 斑马鱼鳃弓部CYPlAl表达对二嗯英类污染物质 的生物学评价 杨景峰，王思珍，董武+ 摘要：二嗯英为主的POPs物质(PersistentPollutants，持久性残留性有机污染物质) Organic 是环境中具有高残留性、广泛分布性和高生物毒性的物质。本实验使用其中毒性最强的环境污染物 为标准对斑马鱼胚胎进行了染毒。通过原位杂交技术检测到o．Ipg／L，o．3pg／L，0．5斗g／L，1．Opg／L 的TCDD在鳃弓部的CYPlAlmRNA表达量存在明了的浓度一剂量关系，进一步通过免疫学反应， 检测出的cYPlAl蛋白质表达亦存在清晰的浓度一剂量关系。这说明用CYPlAl在鳃弓部位的表述 强度以及结合形态学进行超微量二嗯英污染物质的生物学评价具有一定的可行性。 关键词：CYPlAl基因；二嗯英；鳃弓；斑马鱼，生物学评价 1．引言 二嗯英为主的POPs物质(PersistentOrganicPollutants，持久性残留性有机污染物质)是环境 中具有高残留性、高生物浓缩性和高生物毒性的物质。所以我国对POPs的研究也越来越受到重视， 人们对二嗯英类物质危害的意识也不断加强，预想我国对二嗯英类为主的持久性环境持久污染物质 的评价标准也将逐步提高。但国内对二嗯英的研究仅限于极其狭窄的领域和范围，尚未形成研究体 系，有待于进一步加强研究， 尤其是其对有机体的毒性作用机制，污染评价体系以及我国污染状 况的调查迫切需要进一步深入研究u—J。 在美国、日本等国家，针对有关二嗯英类的污染状态、评价标准等，他们每年都对其本国各地 的污染状况进行系统调查。二嗯英类物质的评价， 以美国EPAl613方法为代表的高分辨气相色谱 员会正在着手建立食品二嗯英限量标准和相应检验方法，起草人认为HRGC-HRMS是目前唯一适 用的化学方法，但存在昂贵、复杂、确定范围较狭窄等缺点。更重要的是，所测定的二嗯英类化学 物质并不能完全反映对有机体的复合污染状况，这是由于二曙英类化学物质对细胞芳香烃受体的联 合作用，不都是相加作用，还有协同和拮抗作用。所以生物学方法已经成为各国学者探讨或正在实 Reduction Evaluation； 施的方法之一。在美国，环境保护厅(USEPA)首先推出“毒性削价法(Toxicity TRE)”。此种评价方法是使用藻类以及鱼类分阶段的对有毒物质排出源进行检测评价，如果排放 出毒性物质浓度对鱼类有影响的话，继续要求削减，直到削减到无影响浓度【2一J。 有关二嗯英的评价，特别是生物学评价系的论述较少，但越来越受到中外学者的重视。又由于 二嗯英类化学物质对细胞芳香烃受体的联合作用，不都是相加作用，还有协同和拮抗作用，斑马鱼 的生物学评价法能够更准确地反映二嗯英类化学物质对机体的影响，反映环境和机体的关系。二嗯 英类对人体的毒性作用机制、基因毒性学研究，是解开POPs的环境．机体相互作用机制的要点，是 保护人体健康的前提与基础，也是生物学评价的依据。二嗯英中最具有典型性的2，3，7，8．四氯一 血液循环系统障碍，已经成为广为人知的典型症状【3。5]。在鱼类也观察到斑马鱼下颌的低形成。有 关这些症状的机制，虽被公认的部分是TCDD首先与细胞质内的芳烃基受体(AhR)竞争性相结合， nuclear 再与核内的转录因予AhR DNA相应领域(dioxinresponse 录因子的活化，进而引起一系列基因转录调节的变化L5’6J。本研究在二嗯英的基因毒性学研究的基 312 持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 础上，充分利用TCDD在鳃弓部位，以浓度为依存诱导CYPlA的表达，探讨了以斑马鱼鳃弓部评 价污染状况的生物学评价方法的可行性。 2．材料和方法 2．1药物 Labora