受體的放射配体结合分析法.doc

第八章 受体的放射配体结合分析与应用 第一节 概述 受体（receptor）是细胞膜上或细胞内的一些能与生物活性物质相互作用并引起特异性生物效应的蛋白质。受体与配体结合后，通过受体特定的信号传递系统，引起细胞的特定反应，是高等动物适应环境、协调机体各种细胞功能的关键性分子。用放射性核素标记的配体（radioligand）与相应的受体进行特异结合反应，从而对受体进行定性和定量，此即为受体的放射配体结合分析法（radioligand binding assay of receptors, RBA）。定量的RBA是在已知配体与受体反应的基础上，通过结合反应得知一定量的组织或细胞能与该放射性配体结合的受体数，称结合位点数（number of binding sites）。亲和力则以平衡解离常数表示。定性RBA则通过反应量效关系、某些参数的变化等判断受体的类型、单位点或多位点系统、受体与配体相互作用的特点等。 RBA出现前，虽然提出了受体的一些基本概念，如配体占领学说、激动剂和拮抗剂、配体结合反应的质量作用定律等，但对受体的研究主要靠观察受体激动剂或拮抗剂的生理效应或药理效应。20世纪60年代，由于放射性探测的灵敏度高、核素标记物不改变配体的构型，可用来直接观察配体在亚细胞组分中的分布，并进行精确定量。RBA使受体的研究从间接观察进入了直接观察，从宏观进入微观，许多不易或无法用生理（或药理）效应进行观察的受体得以精确定量，并进而对受体分子进行纯化，分析结构。受体的研究从20世纪70年代已经扩展到了神经递质、激素、细胞因子的作用机制、细胞水平的调控机制、疾病的发病机制及疾病的诊断等方面，渗透到了许多学科领域，受体的研究进入了分子生物学水平。 自20世纪80年代以来，随着新技术、新方法的应用，受体的研究取得了长足的进展。例如，利用基因克隆技术测定受体分子的一级结构，上百种受体的氨基酸序列得以阐明，测出某种受体的不同亚型在氨基酸序列上的差别，为受体亚型的确定奠定了基础；用点突变技术确定受体结合位点在分子中的位置；利用单克隆抗体、荧光和酶等非放射性标记物来定位受体，丰富了受体的研究方法。但这些分子生物学技术并不能直接观察受体的数量和分布，更无法了解受体与配体的亲和力。免疫学技术对研究受体也很重要，但是用抗体观察到的是受体分子的免疫学活性，而不是受体的生物活性。只有RBA能直接观察受体的数量和亲和力，因此这一技术目前仍在广泛地应用，且在不断地发展。 一、受体的分类及亚型 根据在细胞内的定位可将受体分为膜受体、核受体。近年来研究发现，原来认为位于细胞浆内的受体，在完整细胞内实际上是位于细胞核上的，当未和激素结合时，核受体与染色体的亲和力较低，易从上面脱落下来。用不破坏细胞的方法进行观察（如免疫荧光法），可发现这些受体几乎都在核上。 再根据受体的分子结构及信息传递方式，又可以将膜受体及核受体分别分为以下几类： （一）膜受体（membrane receptors） 由胞膜外、胞膜内及跨膜区三部分组成，配体在细胞外侧同受体的胞外部分或跨膜部分上的特定结合位点结合后，受体的分子构型发生变化，通过膜内部分启动相应的信息传递机制，引起细胞功能变化。根据受体的分子结构和受体后信息传递方式，膜受体又分为4种（图8-1）： 图8-1 受体示意图 1．G-蛋白（鸟苷酸结合调节蛋白）偶联型受体家族 该型受体均有7个跨膜区，受体膜内部分与G-蛋白偶联。许多神经递质、生物胺类、小分子肽、某些多肽的受体都属于此类。当激动剂作用于受体时，通过激活G-蛋白，再通过受体后的信号传递机制把信号传递到效应器，引起细胞功能变化。 2. 单一跨膜区有激酶活性型受体（酶联受体）家族 该型受体只有一个跨膜区，膜内结构域均有一个激酶（酪氨酸激酶或其他）活性区段。各类生长因子受体和胰岛素受体属此类。受体与激动剂结合引起受体分子构型变化，使激酶激活，从而将细胞外的信号传递到细胞内该酶的底物，引起功能变化。 3. 单一跨膜区无激酶型受体（与可溶性激酶偶联的受体）家族 该型受体只有一个疏水的跨膜区段，膜外结构都类似纤维结合素（fibronectin），也称fibronectin样受体。受体无激酶活性区，但可激活细胞内的可溶性酪氨酸蛋白激酶。生长激素受体、很多细胞因子受体属此类。 4. 离子通道型受体家族 这类受体蛋白本身组成一个跨膜的离子通道，几个亚单位围成中央空隙，竖插在膜上，中央空隙就是离子通道。通道的开或关控制一些离子的跨膜流量，并通过改变细胞内离子浓度影响细胞功能。此类受体调控的离子主要是Na+、K+、Cl-、Ca2+。N-胆碱受体、GABA受体属此类。 （二）核受体（nucleus receptors） 本