14临本(查)第一章蛋白质的结构与功能讲解.ppt

因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。 六、应用化学或反向遗传学方法可分析多肽链的氨基酸序列 分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成 测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基 把肽链水解成片段，分别进行分析 测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法 一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。 通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列 按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列 分离编码蛋白质的基因 测定DNA序列 排列出mRNA序列 七、应用物理学、生物信息学原理可进行蛋白质空间结构测定 二级结构测定 通常采用圆二色光谱(circular dichroism，CD)测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量。 ?-螺旋的CD峰有222nm处的负峰、208nm处的负峰和198 nm处的正峰三个成分；而?-折叠的CD谱不很固定。 三级结构测定 X射线衍射法(X-ray diffraction)和核磁共振技术(nuclear magnetic resonance, NMR)是研究蛋白质三维空间结构最准确的方法。 同源模建：将待研究的序列与已知结构的同源蛋白质序列对齐——补偿氨基酸替补、插入和缺失——通过模建和能量优化计算，产生目标序列三维结构。序列相似性越高，预测的模型也越准确。 折叠识别：通过预测二级结构、预测折叠方式和参考其它蛋白的空间结构，从而产生目标序列的三维结构。 从无到有：根据单个氨基酸形成二级结构的倾向，加上各种作用力力场信息，直接产生目标序列三维结构。 根据蛋白质的氨基酸序列预测其三维空间结构： 归纳 蛋白质的结构与功能 蛋白质分子组成 蛋白质分子结构 蛋白质结构与功能 蛋白质理化性质 蛋白质的分离、纯化与结构分析 蛋白质一级结构：肽键、肽链等概念 蛋白质空间结构：二、三、四结构概念、次级键 各级空间结构稳定因素 两性解离与PI 胶体性质 变性与凝固 紫外吸收性质 呈色反应 蛋白质一级结构与功能的关系 蛋白质空间结构与功能的关系 元素组成、特点 基本组成单位-氨基酸、氨基酸结构特点、氨基酸的分类、理化性质 你会做吗？ 练习题 1．某一溶液中蛋白质的百分含量为45％，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为： A．8.3%B． 9.8% C． 6.7% D．5.4% E．7.2％ ? 2．下列含有两个羧基的氨基酸是： A．组氨酸 B．赖氨酸 C．甘氨酸 D．天冬氨酸 E．色氨酸 ? 3．下列哪一种氨基酸是亚氨基酸： A．脯氨酸 B．焦谷氨酸 C．亮氨酸 D．丝氨酸 E．酪氨酸 ? 4．维持蛋白质一级结构的主要化学键是： A．离子键 B．疏水键 C．肽键 D．氢键 E．二硫键? 5．关于肽键特点的错误叙述是： A．肽键中的C-N键较C-N单键短 B．肽键中的C-N键有部分双键性质 C．肽键的羰基氧和亚氨氢为反式构型 D．与C-N相连的六个原子处于同一平面上 E．肽键的旋转性，使蛋白质形成各种立体构象 6．关于蛋白质分子三级结构的描述，其中错误的是： A．天然蛋白质分子均有这种结构 B．有三级结构的多肽链都具有生物学活性 C．三级结构的稳定性主要是次级键维系 D．亲水基团聚集在三级结构的表面 E．决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基 7．具有四级结构的蛋白质特征是： A．依赖肽键维系四级结构的稳定性 B．在三级结构的基础上，由二硫键将各多肽链进一步 折叠、盘曲形成 C．每条多肽链都具有独立的生物学活性 D．分子中必定含有辅基 E．由两条或两条以上具有三级结构的多肽链组成 ?? 8．变性蛋白质的主要特点是： A．粘度下降 B．溶解度增加 C．不易被蛋白酶水解 D．生物学活性丧失 E．容易被盐析出现沉淀 ? 9．蛋白质分子在280nm处的吸收峰主要是由哪种氨基酸引起的 A．谷氨酸 B．色氨酸 C．苯丙氨酸 D．组氨酸 E．赖氨酸? 下课了！ 在自然界中存在的蛋白质估计约有百亿种，人体内的蛋白质也有10万种以上。 * * * * * * * * * 五、应用蛋白质呈色反应可测定溶液中蛋白质含量 1.茚三酮反应 2.双缩脲反应 1. 茚三酮反应 氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。 由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。 NH3 CO2 RCHO + 还原性茚三酮 + (弱酸) 加热 3H20 氨基酸与茚三酮反应 水合性茚三酮 + 2NH3 +