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TRIreagentRNADNA中文操作說明(RNA
Molecular Research Center TRI reagent (TR-118)
Ver: 111ED
TRI reagent
RNA / DNA / 蛋白質 三效分離試劑
中文操作說明 (RNA 純化)
基本原理：
TRI reagent 是一種新型 total RNA 抽取試劑，內含異硫氰酸胍等物質，能迅速破碎細胞，
抑制細胞釋放出的核酸酶。並可依實驗需要，從同一樣本中純化出 RNA/DNA/蛋白質。可搭配
層析試劑 BCP(BP 151)取代氯仿的毒性危險。
準備工作：
1. 實驗器材處理
a. 塑膠製品：儘可能使用一次性無菌塑膠製品。已標明 RNase-free 的塑膠製品，如沒有開
封使用過，通常不需再處理。處理方法如下：
在玻璃燒杯中注入去離子水，加入 DEPC 使其終濃度為 0. 1% 。
注意：DEPC 為活性很強的劇毒物，須在通風櫃中小心使用。
將待處理的塑膠製品放入一個可以高溫滅菌的容器中，注入 DEPC 水溶液，使塑膠製
品的所有部分都浸泡到溶液中，在通風櫃中 37℃或室溫下處理過夜。
將 DEPC 水溶液小心倒入廢液瓶中，將裝有 DEPC 水處理過的塑膠製品的容器以鋁箔
封口，高溫高壓蒸汽滅菌至少 30 分鐘。
滅菌塑膠製品在合適的溫度(80℃)下烘烤乾燥。置潔淨處備用。
b. 玻璃和金屬物品：
以 DEPC 水處理或 250℃烘烤 3 小時以上。
2. 試劑準備
a. RNA 純化
均質化：TRI Reagent
層析：BCP 或 chloroform
沈澱與清洗： 100% isopropanol, 75% ethanol (用 DEPC 水配製)
回溶：FORMAzol,或 0.5% SDS 或 DEPC water
b. DNA 純化
純化： 100% Ethanol
清洗：0.1M trisodium citrate in 10% ethanol, 75% ethanol
回溶：8mM NaOH
c. 蛋白質純化
純化：Acetone
清洗：wash solution (0.3M guanidine hydrochloride in 95% ethanol + 2.5% glycerol)
回溶：1%SDS 或 10M urea 或其他適用試劑
Pan Asia Biomedical Technology Inc. 亞醫醫學器材股份有限公司 .tw
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Molecular Research Center TRI reagent (TR-118)
Ver: 111ED
RNA 純化操作步驟：
1. 均質化 每 ml 試劑
a. 軟組織：將組織先剪碎，再與 TRI reagent 共同置於鐵氟 樣品 加入樣品量
龍研磨管或電動均質機中研磨。
使用均質機時組織體積不可超過試劑體積的 10% 。 培養細胞 5~10×106
b. 硬組織：在液態氮中將組織碾磨成粉末，趁液態氮尚未揮 動物組織 50mg
發光時，移到 1.5 ml 離心管中。再加入 TRI reagent 細菌 1×107
c. 細胞：貼附型細胞 10 cm2
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