第八讲沉析[Chapter8Precipitation]合编.ppt

Chapter 8沉 析Precipitation 通过本章学习应掌握以下内容 什么是沉析？ 沉析法纯化蛋白质的优点有哪些？ 沉析的一般操作步骤是什么？ 何谓盐析？其原理是什么？ 盐析操作时常用的盐是什么？ 影响盐析的主要因素有哪些？ 有机溶剂沉析法的原理是什么？ 影响有机溶剂沉析的主要因素有哪些？ 等电点沉析的工作原理是什么？ 其它常用的沉析方法有哪些？ 何谓沉析？ 利用沉析剂使所需提取的生化物质或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。 特点：操作简单、经济、浓缩倍数高 种类：盐析、有机溶剂沉析、等电点沉析等 缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强 一般沉析操作的过程 Step 1 在经过滤或离心后的样品中加入沉析剂； Step 2 沉淀物的陈化，促进晶体生长； Step 3 离心或过滤，收集沉淀物； 盐析(Salt induced precipitation) 概念：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 盐析原理 首先需要了解生物大分子在水溶液中的存在状态： 两性电解质，由于静电力的作用，分子间相互排斥，形成稳定的分散系 蛋白质周围形成水化膜，保护了蛋白质粒子，避免了相互碰撞 盐析过程 当中性盐加入蛋白质分散体系时可能出现以下两种情况： （1）“盐溶”现象—低盐浓度下，蛋白质溶解度增大