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犬DNA遗传标记技术研究现状及应用前景 叶俊华杨前勇公安部南昌警犬基地 犬和地球上所有的生物一样，其遗传信息的携带和传递都是由脱氧核糖核酸(DNA)来 完成的，DNA是犬遗传的物质基础，国内外对犬的DNA标记技术进行了一些研究和探索，现 综述于下。 一、研究现状 用范围和优缺点。 (一)、核DNA遗传标记 1、限制性片段长度多态性Bvotesteln等(1980)首先研究了人类基因组的限制性片段长 度多态性。由于碱基突变引起限制性酶切位点的消失和出现，或小片段的插人或缺失引起 酶切位点的移位，称之为碱基对替换多态；由于染色体重排，如大片段的插入和缺失，并不 改变酶切位点，但能改变电泳条带，称之为染色体重排多态。任何位于插入片段或缺史片 段的酶都可以检测染色体重排而导致的RnPB。可以这样说，真正的进行大量的基因组研 究是从RFLP开始的，因此P,FIP也是一种最早的分子标记方法之一，应用广泛，可作为DNA 指纹用于个体识别，亲子鉴定等．结合池DNA的方法进行遗传结构分析，以及在传染性疾病 C等人在两种意大利犬细小病毒(ClW)型进化迹象研究中，应 诊断中的应用，如Buonavoglla V等人在两个意大利G3PSA犬轮 用RFLP化验技术解决了两种病毒的分型难题。Mar№lla 状病毒种遗传和隔离的研究中，应用RHP技术对这两个种进行鉴别。还可用于性另H鉴定。 由于该标记技术存在操作过程复杂、条件不稳定以及对模板DNA的质量和浓度要求比 较高等缺点，而受到一定的限制，随着其他更方便准确的标记技术的出现和完善而逐渐淘 M等人应用优化的聚合酶 汰。2、聚合酶链式反应／限制性片段长度多态性日本Mumkami 链式反应／限制性片段长度多态性分析技术建立了一个准确的犬性别鉴定方法，并证明这 个方法可以应用在犬的不同品种中2、短串联重复顺序又称微卫星DNA，是2—6bp的可变 数量的高度串联重复多态性序列。是目前最流行的分子遗传标记之一，应用非常广泛，能 够进行遗传结构分析，亲子鉴定，基因定位和构建基因组图谱，基因定位、遗传疾病的连锁 分析以及作为法庭证据的应用。Icklkawa—Y(2001年)等研究拉布拉多犬的DNA亲子鉴定， 选择20微卫星个标记位点进行聚合酶链式反应扩增检测得出父权概率为0．999920；叶俊华 (2005)等A选用不同染色体上的10个微卫星标记对七个警用犬种进行亲子鉴定实验并得 DNA样品，以STR作为界标，采用荧光原位杂交技术构建犬x染色体的遗传图谱。定位了 PJ等人采用短串联重复顺序连锁分析，对 37个遗传标记，28个标记被绘制成图；Todhunter 147头拉布拉多犬和美国灰犬以及它们的杂交后代，就遗传疾病——髋关节发育异常的进 行实验研究，结果得到，所有的杂合度比率为o．7535，有35头回交Fl代中髋关节背外侧半 脱位指数为O．8，少数出现髋关节炎，这些数据能为髋关节发育异常的数量性状位点定位打 Z等人应用短串联重复顺序分析技术侦破一宗涉及匈牙利犬攻击小孩 下很好的基础；Padar 26 致死的案例，采用的是荧光标记多重聚合酶链式反应技术，最终锁定两头行凶犬。国内湖 北省刑侦总队有关技术人员，采用犬的短串联重复顺序分析方法．对阴道擦拭物使用荧光 标记多熏聚合酶链式反应，最终协助新疆石河子警方侦破一起恶性强奸案。 3、随机DNA扩增片段长度的多态性，是建立于PCR基础之上的，利用随机的脱氧核苷 酸序列作引物(一般910碱基对)。对所研究的基因组DNA体外扩增，扩增产物经电泳分离 染色后，来检测其多态性，这些扩增DNA片段多态性便反映了基因组相应区域的DNA多态 性。由于其独特的检测DNA多态性的方式即极快速、简捷、高效等优点，使得随机DNA扩 增片段长度的多态性分析技术已渗透于有关基因研究的各个领域。黄朝峰等利用HAPD技 术分析实验用比格犬的遗传背景，他们筛选了16个RAPD引物对40个样品的分析，共得到 93个扩增条带。经计算得所有样品的相似系数80．4％到100％间变动，平均相似系数为93． 28％，并聚类分析得到这些个体的同源树资料。这些结果可以为以后的比格犬繁育生产和 生物医药学的研究应用提供技术指导。