正常小鼠和IL-10基因敲除小鼠肠道菌群T-RFLP分析论文及综述讲义.doc

桂林医学院毕业设计（论文） 正常小鼠和IL-10基因敲除小鼠肠道菌群多态性分析 院 系: 生物技术学院 学 号: 0931018 姓 名: 程骏 专 业: 2009级生物技术 指导老师: 朱嗣博 2013年5月22日星期三正常小鼠和IL-10基因敲除小鼠肠道菌群多态性分析 2009级生物技术 程骏 指导老师 朱嗣博 摘要 【目的】设计应用T-RFLP技术，对正常小鼠和IL-10基因敲除小鼠的肠道菌群进行多态性分析；【方法】设计一个引物的5‘末端用荧光物质标记（常用荧光物质有HEX,TET,6-FAM等），使样本DNA经PCR后都带有这种荧光物质；【结果】PCR产物经纯化后酶切，可以先进行琼脂糖凝胶电泳，最后对酶切后的产物末端进行测序得到了T-RFLP 峰谱图, 该图谱能够快速准确地对不同种的菌群进行定性、定量的分析；【结论】成功使用T-RFLP技术对正常小鼠和IL10基因敲除小鼠的肠道菌群进行多态性分析，得到两种小鼠肠道菌群的差异性，经分析可以得到一种或几种菌群对于IL-10有特殊的联系。对于IL-10的应用有重要作用。 关键词 T-RFLP技术；基因图谱；IL-10基因 Il-10 GENE knockout mice and normal mice intestinal flora polymorphism analysis 2009-biotechnology Cheng Jun Supervisor ZhuSibo Abstract 【 Objective 】 Designing application of T - RFLP technique, the normal mice and IL-10 knockout mice intestinal flora polymorphism analysis. 【 Methods 】 Designing a primer 5 terminal marked with fluorescent substances (commonly used fluorescent substance has a HEX, TET, 6 - FAM, etc.), after making the sample DNA by PCR with the fluorescent substance. 【 Results 】 PCR product after purification of the enzyme, can first carries on the agarose gel electrophoresis, finally after enzyme digestion of the end product sequencing got T - RFLP peak spectra, the map can rapidly and accurately for different kinds of microbes for qualitative and quantitative analysis. 【 Conclusion 】 Successful using T - RFLP technique of IL-10 knockout mice and normal mice intestinal flora polymorphism analysis, get the differences of two kinds of intestinal flora in mice, by the analysis of one or several kinds of bacteria can be have a special connection for the IL - 10. For the application of IL - 10 play an important role. Key words T - RFLP technique; Gene mapping; Il-10 gene 首先介绍一下IL-10，在1989年，Mosmannand及他们的同事描述了一种新的免疫介质，由Th2细胞克隆分泌，能够抑制Th1细胞克隆IL-2和IFNr的合成。早期被命名为细胞因子合成抑制因子（CSIF），这种因子后来被命名为IL-10，在这被发现的21年期间，很多研究深入剖析了这个细胞因子的生物学特性. IL-10的分子量为35～40kd，通常为二聚体；主要由2细胞产生，也可由单核细胞、角质细胞及活化的细胞产生。-10能够抑