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第八章 弧 菌 科 包括一群氧化酶阳性、具有端极鞭毛、动力阳性的细菌：分为弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属等四个菌属。 第一节 弧菌属 共有36个种。有14个种与人类感染有关。其中以霍乱弧菌和副溶血弧菌最为重要，它们分别引起霍乱和食物中毒。 （一）临床意义 是烈性肠道传染病霍乱的病原体。有155血清群；其中0l群有古典和EI-Tor两种生物型。巳发生七次世界性霍乱流行，均由01群引起，前六次为古典生物，第七次为EI-Tor生物型。1992年10月起分离到非01群霍乱弧菌，与01～0138群霍乱弧菌抗血清不凝集，产生的肠毒素。经核苷酸序列同源性分析，属于同一霍乱弧菌，将其命名为新的血清群0139。 (二)细菌特征1 1．形态结构 G-阴性，弧形或逗点状，在病人“米泔水”样便中呈“鱼群”样排列，细菌一端有鞭毛，呈“穿棱”样运动，有菌毛和性菌毛，0139群有荚膜。 2．抗原成分 有不耐热H抗原和耐热的O抗原。前者为共同抗原，特异性低；后者具群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。根据O抗原的不同，现有155个血清群，其中O1群、0139群引起霍乱。出现36kb的新基因，替代原有的01群抗原基因，遗传学特征和毒力基因与O1群相似。其余02群—0138群引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称为非Ol群霍乱弧菌。 (二)细菌特征2 3.培养特性 营养要求不高，在普通琼脂上生长良好。兼性厌氧。37℃为适宜。具耐碱性，初次分离常选用pH8．5的碱性胨水进行选择性增菌培养，经35℃4h～6h增菌后可在液体表面形成菌膜、常用的选择性培养基硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS)。发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。 氧化酶阳性，发酵蔗糖，动力阳性，赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性：无盐培养基上生长，高于6％氯化钠的培养基上不能生长。 (二)细菌特征3 4．变异性 经人工培养，长久保存可失去典别的弧形而成直杆状，或多形性。 EI-Tor生物型的溶血特性丧失。有毒株也可成为无毒株，强毒株成为弱毒株。 5．抵抗力 霍乱弧菌可在水中存活20天左右。对热、干燥敏感；100％ 1～2min即死亡。怕酸而耐碱，在正常胃酸中仅能生存4min。对常用消毒剂敏感，0．5ppm氯 15min死亡，对庆大霉素耐药。 (三)微生物检验 1.在发病早期，在使用抗生素前采集“米泔水”样粪便标本，就地接种碱性胨水增菌。 2.直接荧光抗体染色，抗O1群抗体凝集试验，可快速诊断霍乱弧菌感染。 3．分离、培养与鉴定 将标本直接接种碱性胨水， 35℃ 6～8 h后，接种至TCBS平板或庆大霉素琼脂平板，35℃ 12h～18h形成黄色菌落形态，均为可疑菌落：应使用Ｏl群和Ｏ139群多价和单价抗血清进行凝集，结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告。 4.抗生素药敏试验 常规测定氨苄西林、四环素、氯霉素、SMZ+TMP、呋南唑酮；对于具有半自限性腹泻而言，体外药敏试验非必需，对监控弧菌的耐药性发展趋势有意义。 5.抗体检测 抗体的测定可用于霍乱的回顾性诊断和培养不能确定的霍乱病例的辅助诊断。血清学试验主要测定杀菌抗体和抗毒素抗体。在感染发生后的十天内，特异性杀菌抗体和抗毒素抗体升高，在非流行地区杀菌抗体的效价将在1-6个月内降至原来的基础水平。而抗毒素抗体则可维持l-2年后下降，但不会降至原来的基础水平。 ? (四)霍乱弧菌的鉴别试验 (1)霍乱红试验：霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。当将霍乱弧菌培养于含硝酸盐的蛋白胨水中时，分解培养基色氨酸产生吲哚。同时，还原硝酸盐成为亚硝酸盐，两种产物结合成亚硝酸吲哚。滴加浓硫酸后呈现蔷薇色，是为霍乱红试验阳性。 (2)粘丝试验：将0．5％去氧胆酸钠水溶液与霍乱弧菌混匀成浓悬液。lmin内悬液由混变清，并变得粘稠。以接种环挑取时有粘丝形成，弧菌属均有此反应。 (3)0／129敏感试验：参照标准药敏试验的方法进行。将O／129(2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶)药敏纸片lOμg及150μg的纸片贴在接种有待测菌的琼脂平板，35℃18～24h孵育后，纸片周围任何大小的抑菌环均表现为敏感。 (4)鸡红细胞凝集试验：古典生物型阳性，E1-Tor生物型阴性。在洁净的玻片上滴加生理盐水1滴，取18-24h的细菌斜面培养物与生理盐水混匀成浓厚菌悬液。加入用生理盐水洗涤三次的2．5％新鲜鸡红细胞盐水悬液一滴充分混匀，１ｍin内出现凝集为阳性。 (5)多粘菌素Ｂ敏感试验：在50℃的普通琼脂中加入50μg／m1多粘菌素Ｂ，混匀后倾注平板，凝固后备用，取被测菌株的3h的肉汤培养物，接种于平板表面，35℃ 18～24h后双察有无细菌生长。古典生物型不生长为敏感，EI-To