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第四章 分子发光分析 分子发光包括荧光、磷光、化学发光、生物发光和散射光谱等。 分子发光分析法教学要求 掌握分子荧光、磷光和化学发光的产生机理；掌握激发光谱和发射光谱特征。 掌握荧光与分子结构的关系以及溶液的荧光（磷光）强度影响因素。 了解荧光（磷光）分析法的特点及定量测定方法。 了解磷光分析法的类型。 了解荧光、磷光和化学发光分析仪器的结构。 第一节 分子荧光和磷光分析 “发光” 每种物质分子中都具有一系列紧密相隔的电子能级，而每个电子能级中又包含一系列的振动能级和转动能级。 当分子吸收能量(电能、热能、光能或化学能等)后可跃迁到激发态。分子在激发态是不稳定的，它很快跃迁回到基态。 在跃迁回到基态的过程中将多余的能量以光子形式辐射出来．这种现象称为“发光”。 （一）磷光和荧光 荧光和磷光，并不是说物体自然发光。当物质吸收外界能量后，转换成为可见光，即时转换的称为荧光，如荧光笔，荧光材料； 如果可持续发光就称为磷光，如闹钟晚上关灯可以看到数字及指针。 （二）荧光与磷光的产生过程 luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 2.电子激发态的多重度 单重态与三重态 如果在跃迁到高能级的过程中还伴随着电子自旋方向的改变，这时，分子便具有两个不配对的电子，则s=1，M=2s+1=3，该分子处在激发的三重态，用符号T表示。 处在激发态的分子是不稳定的，它可能通过辐射跃迁或非辐射跃迁等去激发过程回到基态，当然，也可能由于分子之间的作用产生去激发过程。辐射跃迁去激发过程有光子的发射时，产生荧光或磷光现象，非辐射跃迁指以热的形式辐射多余的能量，包括振动弛豫、内部转移、系间跨越、外部转移等。各种跃迁方式发生的可能性及其程度，既和物质分子结构有关，也和激发时的物理和化学环境等因素有关。 3.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 第一节 分子荧光和磷光分析 荧光、磷光 能级图 第一节 分子荧光和磷光分析 内转移 当两个电子能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。右图中指出，处于高激发单重态的电子，通过内转移及振动弛豫，均跃回到第一激发单重态的最低振动能级。 荧光、磷光 能级图 第一节 分子荧光和磷光分析 荧光发射 处于第一激发单重态中的电子跃回至基态各振动能级时，将得到最大波长为?3的荧光。注意：基态中也有振动驰豫跃迁。很明显， ? 3的波长较激发波长? 1或? 2都长，而且不论电子开始被激发至什么高能级，最终将只发射出波长? 3为的荧光。荧光的产生在10-7-10-9s内完成。 荧光、磷光 能级图 第一节 分子荧光和磷光分析 系间窜跃 指不同多重态间的无辐射跃迁，例如S1→T1就是一种系间窜跃。通常，发生系间窜跃时，电子由S1的较低振动能级转移至T1的较高振动能级处。有时，通过热激发，有可能发生T1→S1，然后由S1发生荧光。这是产生延迟荧光的机理。 荧光、磷光 能级图 第一节 分子荧光和磷光分析 磷光发射 电子由基态单重态激发至第一激发三重态的几率很小，因为这是禁阻跃迁。但是，由第一激发单重态的最低振动能级，有可能以系间窜跃方式转至第一激发三重态，再经过振动驰豫，转至其最低振动能级，由此激发态跃回至基态时，便发射磷光，这个跃迁过程（T1→S0）也是自旋禁阻的，其发光速率较慢，约为10-4-10s。因此，这种跃迁所发射的光，在光照停止后，仍可持续一段时间。 荧光、磷光 能级图 第一节 分子荧光和磷光分析 外转移 指激发分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 荧光与磷光的根本区别： 荧光是由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的；而磷光是由激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的。 第一节 分子荧光和磷光分析 （三）激发光谱曲线和荧光、磷光光谱曲线 荧光和磷光均为光致发光，因此必须选择