甘油介导的疏水色谱复性重组人α干扰素.pdfVIP

L019 甘油介导的疏水色谱复性重组人α-干扰素 1 2,3 1 1 1 1 李京京 王芳薇 刘永东 罗天乐 闭静秀 苏志国 （1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080 ；2. 大连理工大学, 辽宁 大连 116024；3. 大连医科大学第二临床医学院， 辽宁 大连 116027 ） 摘 要 本文建立了一种有效的α干扰素复性的方法，将疏水色谱和具有水化能力的渗透质－甘 油相结合用于重组人α-干扰素的复性，旨在保持疏水介质抑制蛋白聚集的能力，同时使蛋白质在 逐渐增加的亲水环境中折叠，并加强蛋白质自身的疏水坍塌趋势，最后导致天然结构的恢复。疏 水介质溶液分批辅助α-干扰素复性结果表明，聚集沉淀被成功地抑制，然而可溶性干扰素收率随 介质的疏水性增强而下降，说明疏水介质可以抑制聚集，但介质疏水性过强会阻止干扰素折叠， 导致其吸附，弱疏水介质则提高可溶性干扰素的收率。Poros ET 复性干扰素的蛋白收率为68.2 ％， 而直接稀释的收率为 45 ％。 变性α-干扰素在高浓度盐的缓冲液中吸附到 Poros ET 疏水柱 (1.2×4.5cm I.D., 5ml) 后，盐酸胍梯度将其释放，含不同浓度甘油的复性缓冲液用作洗脱剂。结 果显示，20 ％甘油介导下复性的α-干扰素蛋白收率为84 ％，比活为3.0×108IU/mg, 无甘油介导时 只有43 ％的蛋白收率, 且复性产物比活较低，说明甘油的介入能显著促进蛋白质折叠而提高活性 收率。荧光光谱用于鉴定复性α-干扰素的结构，发现20 ％甘油介导下Poros ET 复性的α－干扰素 最大吸收波长与天然结构一致。反相色谱分析显示，20 ％甘油介导下Poros ET 复性干扰素的活性 峰含量显著高于稀释复性的可溶性产物,而疏水性更强的Poros PE 和50%的甘油浓度不利于活性 结构形成。 关键词: 复性 α-干扰素 疏水色谱 甘油 渗透质 REFOLDING INTERFERON ALPHA WITH HYDROPHOBIC INTERACTION CHROMATOGRAPHY ASSISTED BY GLYCEROL 1 2 1 1 1 LI Jingjing , WANG Fangwei , LUO Tianle , BI Jingxiu and SU Zhiguo (1, National Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, P.O.Box 353,Beijing 100080, P. R . China, 2,Dalian University Of Technology, DaLian , LiaoNing , P. R . China, 116024,3, Second Clinical college, Dalian Media University, DaLian, LiaoNing, P.R.China, 116027) Abstract A promising approach for the refolding of recombinant interferon alpha was investigated. The strategy involving the combination of commercial available hydrophobic media and glycerol, a typical osmolyte with hydration capability,