盐生杜氏藻Dunaliella+salina可溶性蛋白毛细管电泳分离.pdfVIP

蒋继宏黄小花华栋陈风美 (江苏省药用植物生物技术重点实验室，徐州，221116) 高效毛细管电泳(HPCE)是近年发展起来的一种新型的分析及分离技术，具有高效、 快速、微量、灵敏等特点，在化学、生物学等领域得到越来越广泛的应用。盐生杜氏藻是一 种生长于高盐水域的单细胞绿藻，由于其含有大量的13．胡萝卜素甘油、丰富的蛋白质和脂肪以 及没有细胞壁等优点而受到重视【l】。研究表明，盐生杜氏藻随着盐浓度的增加，细胞内的胡萝 卜素也会增加，但用毛细管电泳分析其可溶性蛋白还未见研究报道。本文试图用毛细管电泳 分离分析杜氏盐藻可溶性蛋白的种类，为毛细管电泳技术在藻类生物工程中应用提供依据。 1实验部分 1．1 试验材料盐生杜氏藻(Dunaliella salina)徐州师范大学植物组提供。 1．2仪器和试剂 高效毛细管电泳仪为美国BECKMAN COUTER公司MDQ型产品。石英 毛细管柱(河北永年石英毛细管厂)57cm i．d×75 u m o．d，总长度57cm，有效长度为50cm。检 测器为DAD检测器。磷酸、氢氧化钠等均为分析纯，水用Miili．Q plus制备。 1．3 取培养好的盐藻，离心4000rpm，5min，得藻泥， 用O．1mol／L，pH7．2的T可溶性蛋白的 提取ris．HCl作提取缓冲液，用细胞组织粉碎机破碎盐藻细胞，离心5000rpm，5min，取上清， 即为可溶性蛋白溶液，在4。C保存。 1．4可溶性蛋白的分离与检测条件每次电泳前，分别用O．1mol／L NaOH、去离子水、50mmol／L 硼酸缓冲液冲洗毛细管各2min后，以压力方式进样10s，二极管阵列检测器(DAD)在280nm处 进行检测。起始分离电压为0KV,0。17min电压升至20KV并保持，温度20。C。 2 结果与讨论 2．1 缓冲液体系pH值优化：毛细管电泳中，缓冲溶液的pH值是影响分离的主要因素之一， 分别在pH5．2，pH7．2，pH9．2，的50mmol／L磷酸缓冲液体系中对盐藻可溶性蛋白进行电泳分离， 结果表明，最佳pH值为7．2。 2．2缓冲液体系浓度优化：pH值在pH5．2，pH7．2，pH9．2条件下，用不同浓度(10-100mmol／L) 磷酸缓冲液进行电泳分离，结果表明，最佳浓度均为50mmol／L。 2．3重现性和线性：在缓冲液体系pH值7．2，浓度为50mmol／L的分离条件下，重复进样3 次进行电泳分离，计算8个峰的迁移时间和峰高的相对标准偏差(RSD)分别在0．2．1．8％和 O．5．7．6％ 2．4结论：CZE优化条件为50mmol／L磷酸盐缓冲液，pH7．2，其电泳图谱为图1， ’江苏省教育厅自然基金资助可项目项目号为SLl0002 138 2．5讨论徐坤等(1998)用聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳的方法分析了杜氏盐生藻盐适应蛋 白的种类仁1。本实验首次用高效毛细管电泳分析杜氏盐生藻可溶性蛋白，为分析杜氏盐生藻可 溶性蛋白提供了快捷的条件，为将来进行大批样品的分析测定杜氏盐生藻可溶性蛋白等生化 物质，为藻类生物工程奠定了基础。 薰 图1盐生杜氏藻可溶性蛋白毛细管电泳豳 Fi91．Electrophoresis gram of resoluble protein frOm Dunaliella salina 参考文献 I． 华栋．刘文。倪士峰．盐生桂氏藻新品系的选育[J]．徐州师范大学学报，1998，16(2)：60—62 2． {：籍蛳，李琳，欧阳光察等．杜氏盐藻Dunaliellasalina盐适应相关蛋fa[J]．植物生理学报，1998，24(4)：327·332 139