蘆荟的组织培养快速繁殖技术.docVIP

辽宁林业职业技术学院 园林专业毕业论文 芦荟的组织培养快速繁殖技术 学生姓名： 　 学　　号： 指导教师： 　专　　业： 　 园林 　年　　级：　 班 　目 录 摘要关键词芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。1.引言 近年来，由于芦荟化学及药理学研究的深入，形成了一股世界性的芦荟保健热，从而就带动了我国芦荟栽培产业的发展。芦荟的栽培产业也已开始在我国兴起，但由于芦荟不能自花授粉结实(虽然能开花，但大多数栽培种的芦荟花粉是不孕的，不易产生种子)因此，用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方法主要是分株和分蘖，但难以快速、大量地繁殖种苗，难以满足当今芦荟种植业对种苗的需求。这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。用植物组织培养方法可在短期内繁殖大量规格划一、种性稳定的种苗，具有成本低、效益高的特点2.方法 2.1材料与培养基 材料为l0~l5cm高的芦荟幼苗愈伤组织诱导培养基为MS+(1~6mg/ L)BA+(0.1~0.5mg/L)NAAMS+(2~4mg/L)BA+ (0.1~0.5mg/L)NAA 生根培养基为MS+(0.1~0.5mg/L)IBA+(2~5mg/L)PP332.1.2培养基的选择与配制 培养基是活体植物组织体外保存、生长发育的营养来源。不同的植物都有自己最适合的组培培养基。多数学者认为，MS培养基适宜芦荟芽的分化和增殖培养。潘学峰等筛选古巴芦荟(A.cubana) 侧芽分化的最佳培养基时发现，MS培养基诱导出的侧芽数最多，是芦荟外植体侧芽分化最理想的培养基；其次是H培养基，较差的是KC培养基。 以MS培养基为例，其组成是在配制1升（1000毫升）培养基时，加硝酸铵1.65克、硝酸钾1.9克、氯化钙0.44克、硫酸镁0.37克、磷酸二氢钾0.17克、碘化钾0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸镁22.3毫克、硫酸锌3.6毫克、钼酸钠0.25毫克、硫酸铜0.025毫克、氯化钴0.025毫克、硫酸铁27.8毫克、蔗糖30克和琼脂7克。其他生长调节物质要根据花卉的种类和培养目的而确定。元素浓度高时有利于发展茎叶，而较低时有利于生根，MS培养基中大量元素浓度过高，为此常采用1/2、1/4大量元素浓度作培养用，仅用很低的细胞分裂素，并加入适量的生长素，用最普遍的是NAA这样生长效果好。将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗12次，淋干。在超净台上，先用75%的乙醇将茎尖浸泡3060s，再用升汞浸5-l0min，最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。培养条件为:每天光照 1012h，光照度为x，温度(252)℃。大约1525d后，试管中接种的外植体就可以膨大，形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。愈伤组织形成1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。2.3继代培养 将愈伤组织在无菌条件下，从试管中取出，用镊子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养基，并用无水反复清洗数次，直至愈伤块上无残留培养基为止。用解剖刀将愈伤块切成数个小块，再接种到装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中，在与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。几天后，三角瓶中的小愈伤块即可逐渐长大，这一过程称作继代培养，可反复操作。通过愈伤组织的继代培养，原来接种的1个芦荟茎尖组织可繁殖出大量的新接种材料来，用于分化培养。将愈伤组织在无菌条件下，从试管或三角瓶中取出，用无菌水洗净，切成小接种块，接种到装有分化培养基的三角瓶中，分化培养的条件同愈伤组织培养。大约3050d后，愈伤组织就可分化出芽，并继续长出小叶片。当分化出的幼苗长到一定高度或分化出一定数量后，将这些小幼苗在无菌条件下取出，进行生根培养或重新诱导分化2.5生根培养及苗床假植 当三角瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基MS+NAA0.5mg/L+IBA0.2mg/L的三角瓶中培养，培养条件同分化培养。大约半个月后，幼苗即可生根。当幼苗的根长到一定长度，幼苗形体已显健壮时将幼苗取出，在清水中洗除附着在根上的培养基(注意:一定要严格洗净，否则会烂根)。将洗净的幼苗排好，用清水喷湿，在1525℃、湿度60%80%的条件下炼苗24h，也可视情况缩短为l2h。视幼苗长势，即可移栽到苗圃中将消毒后的芦荟苗取出，摆放在干燥的室内地板上，使其自然脱水，以叶片稍有收缩为度基质以河沙或疏松肥沃的沙质壤土为好，切忌土质粘重、渍水，不可栽植过深，栽稳即可。成活关键：1、温度适宜；2、提高周围的空气湿度(90100%)，使叶面的蒸腾较少，尽量接近培养瓶中的条件，可通过加覆塑料薄膜或在温室内