贝伐单抗联合顺铂对 VEGF 高表达的荷卵巢癌裸鼠腹.PDFVIP

中国临床肿瘤学教育专辑 (2007) 433 贝伐单抗联合顺铂对VEGF 高表达的荷卵巢癌裸鼠腹水的抑制作用 南方医科大学南方医院肿瘤中心 艳军 郑大勇 罗荣城 陈锦章 李爱民 席箐乐 丁雪梅 摘要 目的：建立VEGF 高表达的人卵巢癌细胞株OVCAR3 裸鼠腹水移植瘤模型，探讨贝伐单 抗联合顺铂对荷卵巢癌裸鼠腹水生长的抑制作用，并探讨其作用机制。方法：利用 VPF/VEGF 高 表达的卵巢癌细胞株OVCAR3 建立裸鼠腹水瘤模型。用贝伐单抗、顺铂、贝伐单抗联合顺铂及PBS 分别处理各组裸鼠，观察其对腹水形成、腹水中 VEGF 含量、腹膜渗透性、脉管密度和肿瘤细胞 及红细胞的作用，并比较与化疗药物顺铂联合应用的疗效。结果 使用贝伐单抗治疗组裸鼠的腹 水量、腹膜渗透性受到明显抑制，腹水中的红细胞、癌细胞、血管内皮生长因子水平及肿瘤组织 内微血管密度明显减少，除腹膜渗透性外，贝伐单抗与顺铂联合治疗进一步加强上述治疗效果。 结论：贝伐单抗联合细胞毒药物的生物化疗治疗模式有望成为治疗癌性腹水的一种新方法。 关键词 癌性腹水；抗血管生成治疗；贝伐单抗；顺铂；腹膜渗透性 卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，具有腹膜内癌扩散和形成大量腹水的特征。大量腹水造成的腹胀、 呼吸困难、恶病质等症状严重影响患者的生活质量和疾病预后。尽管手术方法和化学治疗的改进，晚期 复发的卵巢癌患者死亡率仍无明显改善。现有的治疗手段对卵巢癌腹水患者疗效差是其死亡率高居不下 的主要原 。过去几十年来的研究证实，血管内皮生长因子/血管渗透性因子（VPF/VEGF ）可刺激血管 生成和增强血管渗透性，在腹水形成过程中起重要作用。VPF/VEGF通过增加膈肌和肿瘤相关脉管系统的 [1] 渗透性，在腹水尤其卵巢癌腹水形成中起重要作用 。贝伐单抗 （Bevacizumab ）是一种人源化单克隆抗 体，可特异性作用于VEGF 以抑制血管生成和改变血管渗透性。于2004年经美国FDA批准用于晚期结直肠 癌的一线治疗。国外大量报道了贝伐单抗对小鼠原发瘤和转移瘤的抑制作用，但对腹水瘤治疗报道极少。 本实验采用VEGF 高表达的人卵巢浆液性上皮癌细胞株OVCAR3 建立卵巢癌裸鼠腹水瘤模型，研究 anti-VEGF单克隆抗体贝伐单抗治疗卵巢癌腹水的效果和机制。结果显示VEGF表达增强的卵巢癌细胞腹 膜腔内接种后可显著形成大量腹水。贝伐单抗抑制腹水和肿瘤负荷的效果说明其将在治疗卵巢癌和腹水 方面具有一定的价值。 一、 材料与方法 (一) 材料 BALB/c （nu/nu ）裸鼠，由南方医科大学实验动物中心提供，4~6周龄；体重16~20g，雌性；饲养于 SPF级环境中。人卵巢浆液性囊腺癌细胞株OVCAR3和HEY-A8细胞株由中科院上海细胞所提供 （ATCC 产品），经RT-PCR方法检测分别为VEGF高表达和低表达的细胞株。Bevacizumab 由美国Genentech公司提 供。顺铂由齐鲁制药厂生产。ELISA试剂盒购于晶美生物公司。 (二) 人卵巢浆液性囊腺癌细胞腹水瘤模型的建立 将OVCAR3细胞株快速冻融复苏，用RPMI1640 （GBCO ） 养液基 （内含10%胎牛血清，青霉素 100U/ml ，链霉素100U/ml ，谷氨酰胺200mg，丙酮酸钠2ml ）置于37C、4%CO2孵箱中 养，取对数生长 期的细胞以0.25%胰酶、0.02%EDTA消化，2000r/min离心10min，弃上清液，用1640稀释，制成细胞悬液， 6 用0.4% 台盼兰染色后计数活细胞数95%。取200 L细胞悬液注射于48只裸鼠腹腔 （每只3×10 个细胞）。 同时采用VEGF低表达的卵巢癌细胞株HEY-A8进行腹膜内接种，接种方法同上，共接种10只，接种后观 察腹部膨隆和体重变化。OVCAR3细胞种植后2周，裸鼠开始出现腹部膨隆，提示腹水形成。而HO-8910 434 中国临床肿瘤学教育专辑 (2007) 裸鼠无腹部膨隆等症状出现，尸解后OVCAR3裸鼠腹腔