福尔马林浸泡组织及石蜡包埋组织的DNA提取.pdfVIP

· 920 · GuizhouMedica1Journal，2012，Vo1．36，No．10 · 诊 断 技 术 · 福尔马林浸泡组织及石蜡包埋组织的DNA提取* 贵阳医学院法医学教研室(550004) 张红玲 王 杰△ 戴佳琳 黄映康 黄 江 中图分类号：R919 文献标识码 ：B 文章编号：1000—744x(2O12)10—0920—03 doi：10．3969／j．ISSN．1000—744X．2012．10．025 福尔马林浸泡组织及石蜡包埋组织是法医学研究 lO m厚切片 4片置于 1．5mL灭菌离心管中，加入 和检案中较常使用的样本，在医学检验、法医鉴定及病 1mL (10mmol／L Tris—HC1，1mmol／L E】DTA， 理回顾性分析 中应用 日益广泛，其处理过程可导致 0．5A0SDS)溶液，充分震荡 ，7O℃水浴30min，再次震 DNA链断裂、降解、脱嘌呤及DNA一蛋白质交联 ，易造 荡，4℃13000rpm离心10min，弃上清。重复该步骤 成DNA分型失败。本文参阅了近几年的相关文献，成 3次。脱蜡后的组织采用碧云天基因组DNA小量抽 功完成了一例医疗纠纷的同一认定，现报告如下。 提试剂盒(离心柱式)提取样本基因组DNA。 (2)DNA扩增：按照Minifiler试剂盒 (ABI公司) 1 案情摘要 说明书进行扩增，ABI310型遗传分析仪电泳，Gene- 某患者因右侧附睾包块于 2010年 10月在某 中 Mapper软件进行分析，获得各基因座DNA分型。 医院行 附睾切除术 ，经病理诊断为 “(右侧)符合精索 静脉曲张，附睾血管扩张、充血”，术后疼痛未缓解， 3 结果与讨论 后于2012年 2月在某地 区医院再次行 附睾完整切 福尔马林浸泡组织 (图 1)、石蜡包埋组织均获得 除术 ，切下组织一部分浸泡于福尔马林溶液 中由家 了清晰的STR分型图谱 (图2)，与患者血样 的STR 属保存 ，另一部分进行病理检验 ，病理诊断为 “(右 分型图谱(图3)比对后，确定福尔马林浸泡组织、石蜡 侧)附睾慢性炎性增生性病变”，患者家属因怀疑某 包埋组织与血样来源于同一人 。在蜡块组织的制作 中医院弄虚作假，要求进行蜡块、家属保存组织与患 过程中，福尔马林固定能较好的保持组织细胞结构的 者的同一认定 。 完整性，而甲醛是福尔马林固定液中的主要成分，它 在发挥固定组织作用 的同时，也对 DNA分子产生不 2 材料与方法 利影响，导致 DNA链的脆性增加 。有文献报道 [1]，福 2．1 材料 患者血样 ；福尔马林浸泡 4个月的组 尔马林固定 9天以后，STR位点检 出率仅为 5O 左 织 ；5个蜡块组织 。 右，本实验在提取福尔马林浸泡 4个月的组织时，延 2．2 方法 (1)DNA的提取：①患者血样 的DNA提 长了TNE及无水乙醇浸泡的时间，尽量将 甲醛洗脱， 取。采用常规 Chelex-100法提取 DNA。②福尔马林 获得了 9个 MiniSTR的DNA分型。 浸泡组织的DNA提取。取约 0．2g组织置于1．5mL 同时石蜡包埋组织中DNA与蛋 白质之间经广 灭菌离心管中，剪碎，加 1mLTNE浸泡24h，后用无 泛交联形成牢固的复合物，阻碍蛋 白酶对组织的消 水乙醇浸泡24h，其间更换两次无