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中国土壤与肥料 2013(1) 苯 甲酸钠对土壤亚硝酸还原酶动力学参数的影响 李昌满 ，许明惠 (1．长江师范学院生命科学与技术学院，重庆 涪陵 408100； 2．重庆工贸职业技术学院，重庆 涪陵 408000) 摘 要：采用改进的仅一荼胺 一对氨基苯磺酸比色法研究 了苯 甲酸钠对紫色土亚硝酸还原酶动力学参数的影响。 结果表明，苯甲酸钠对灰棕紫泥土亚硝酸还原酶酶促反应的抑制能力随苯甲酸钠浓度的增大而增强，苯甲酸钠的 加入，降低了V K和V一值 ，表明苯甲酸钠对土壤亚硝酸还原酶的作用类型表现为反竞争性抑制作用；苯甲酸 钠是一种优 良的反硝化抑制剂，有 良好的应用前景。 关键词：土壤亚硝酸还原酶；动力学参数；苯 甲酸钠 中图分类号：S145．9；S154．2 文献标识码：A 文章编号：1673—6257 (2013)01—0097—03 土壤反硝化作用是土壤氮素损失的重要途径，产 紫色土，2011年6月 15日按五点法采取5—30cm土 生的N0是大气污染的重要来源。土壤亚硝酸还原酶 样，风干、混匀、研磨，过 1mm筛后备用。基本农 是反硝化作用的关键酶，它是由土壤反硝化细菌产生 化性状 ：有机质 1．14g／kg，碱解氮 106mg／kg，有效 的一种还原类酶，在嫌气状态下将 NO；还原为 NO， 磷 (P205)42．1mg／kg，速效钾 (K20)87．1mg／ NO在一系列酶的作用下被还原为N0和N2…。 kg，pH值5．72。 Hauck采用 N示踪气体直接法研究大 田氮素 1．2 方法 去向得出，肥料氮的平均损失在 25％ ～30％之间， 配制0．19％、0．26％、0．33％、0．40％、0．47％ 并认为肥料氮损失主要是 由于反硝化作用造成 5种浓度 的亚硝酸钠溶液作为底物；配制 0％、 的 。Ryden和 Lund研究发现，反硝化作用损失 0．5％、1．0％、1．5％、2．0％5种苯 甲酸钠质量浓度 的氮总量范围为 95—233kg／(hm -年) J。因此 ， 溶液作为抑制剂，亚硝酸还原酶酶促反应速度测定 抑制反硝化酶的活性，对提高土壤氮素利用率和减 采用改进的0一【荼胺 一对氨基苯磺酸比色法[9，m]。准 少大气污染有重要意义。然而，目前对土壤氮素转 确称取3g土样置于10mL具塞刻度试管中，加入6o 化相关酶的抑制研究，主要关注点在尿素水解与硝 mg碳酸钙和 1％的葡萄糖3mL，分别加 1mL不同浓 化作用第一阶段的相关酶上_4I6J，反硝化抑制剂的 度的亚硝酸钠溶液和不同浓度苯 甲酸钠溶液、补水 研究贫乏 ’。J，有关亚硝酸还原酶的抑制剂研究 至距塞3mm (造成厌氧环境)，塞好瓶塞摇匀后， 很少 ，苯 甲酸钠对亚硝酸还原酶的影响尚未见报 于35℃下培养 12、14、16、18、2O和22h。培养结 道 。本研究是在实验室选用大量试剂对亚硝酸还原 束，将试管的土液混合物转移至50mL容量瓶中， 酶活性影响的研究基础上 ，试图通过研究苯 甲酸钠 加 1mL硫酸铝钾饱和溶液，定容、过滤，吸取 1mL 对亚硝酸还原酶动力学参数影响，为筛选反硝化抑 滤液置于50mL容量瓶 中，加 10mL蒸馏水。然后 加入 1mL显色剂 ( 一荼胺的醋酸溶液与对氨基苯 制剂提供理论基础。 磺酸的醋酸溶液等量混合)。静置20min，定容，在 1 材料与方法 U1800型分光光度计上，于520nm处测定溶液的吸 光度