蔬菜抗毒素突变体离体筛选研究进展.pdfVIP

南方蔬菜产业发展研讨会论文集 蔬菜抗毒素突变体离体筛选研究进展+ 何晓明谢大森彭庆务 (广东省农业科学院蔬菜研究所，广州510640) 摘要抗毒素突雯体离体筛选是创新抗病材料的新途径之一．本文就真菌毒素及其作用机理， 抗病突变体的筛选方法进行了简单综述，通过以病菌滤液和纯化毒素为筛选荆的筛选实例。探讨了 两种筛选方法的利弊，分析了影响筛选效果的因素，以及在应用中存在的问题，展望了抗毒素离体 筛选技术在蔬菜育种抗病材料创新中的应用前景。 关键词毒素，突变体，离体筛选 长期以来植物病害一直是作物生产的重要障碍。抗病育种是高效、安全地地抵御病害为害的重 要举措。而作为抗病育种的基础，抗性材料的创新和筛选是育种工作者的重要任务，在充分利用目 前有限的抗原材料的基础上，如何利用现代生物技术创造新的抗原材料则是当前乃至今后一个阶段 的重要课题。自Carlson Sulfoximine)为选择剂筛选出了抗野火病烟草突变体以来，利用病菌毒素通过离体筛选技术诱导、 筛选和分离抗病突变体引起了广泛的关注，尽管这个领域目前还存在许多争议，但在抗病材料创新 方面取得的成绩是有且共睹的。本文的目的是提供一个关于毒素及其利用毒素进行抗性系筛选方法 的简单综述。探讨这种方法的利弊和提高选择效率的方法。 1 毒素及其作用机制 在病害致病机理中，一个重要作用就是病原菌在植物体内增殖过程中形成对植物有害的代谢产 物即毒素，目前研究较多的毒素为真菌毒素(Mycotoxin)，已知许多作物的病原菌可以产生毒素，如 为害多种瓜类、茄果类等多种作物的镰刀菌(fusarium)可产生镰刀菌酸、琥珀酸、3一苯基乳酸及其 衍生物、B1，4一葡萄糖苷酶等一系列毒素“1，小麦根腐病菌产生HSW-毒素”1，核盘菌属病菌侵染作 索类毒素、糖蛋白毒索等。此外．水稻白叶枯病、稻瘟病、茄子黄萎病等多种病害也分别产生各自 的毒紊嗍。 病原菌毒素的致病作用主要是破坏细胞的膜体系．镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)可 以引起细胞电解质渗透，质膜破裂，原生质外渗，导致植物体萎蔫【s1；也有些毒素的作用位点是线 粒体、叶绿体，也可能通过作用于RNA位点影响蛋白质合成，对寄主蛋白、核酸、酶等引起一系列 不怠反应，导致生理失调．细胞死亡以至整个植株死亡M。 按毒素对寄主植物致病性范围的不同，可分为寄主专化性毒素(HST)和非寄主专化性毒素 。广东省自然科学基金(010110)．广东省科技重大专项项目(2003A2010301)资助项目 7l 南方蔬菜产业发展研讨会论文集 (NHST)。由于这些毒素可以引起寄主植物的过敏性反应，因此可咀用来鉴定和筛选寄主植物抗病性 的差异ffl。 2利用病菌滤液进行离体筛选 infestans) 病原菌的培养液中可能含有多种致病毒紊。Bchnke等首次利用致病疫霉(Phytophora 滤液作为筛选剂，在致死率90％的选择压力下，通过马铃薯愈伤组织培养获得了抗性再生植株碍】， 其后，这个方法已经被许多研究者沿用，并获得了一系列抗性细胞系乃至抗性再生植株(表I)。进 一步的研究表明，通过病菌滤液筛选获得的抗性可以遗传给其后代睁”．在番茄、大豆、黄瓜等作 物中的研究结果指出，愈伤组织对病菌滤液的抗性与植株对病菌的田问抗性具有显著相关性114“)． 显然利用病菌滤液进行抗性材料的诱导和筛选比利用病原菌接种筛选更为方便．加之可以采用 病菌的某种致病力强的株系和专化型，使筛选更加具有针对性，目前为研究者广泛采用。但由于多 数病菌滤液含有多种代谢物，包括多种已知和未知的毒素、酶类和其他成分(4l，其致病毒素的致病 力也因培养基成分、滤液的处理方式的不同而有所差异”“q，笔者在利用枯萎病菌滤液作为筛选剂 进行节瓜抗枯萎病突变体离体筛选时曾发现，低浓度滤液对培养物生长和分化有一定的促进作用． 怀疑其中可能存在一些刺激外植体生长的激素或者其他物质．可见利用病菌滤液进行离体筛选的方 法筛选效果不甚稳定。 表1利用病菌滤液进行离体筛选的实例 3 利用纯化毒素进行离体筛选