表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与Ni^2＋共同作用对舌鳞癌细胞cyclinD1和survivin基因表达的影响.pdfVIP

22 复旦学报 (医学版) 2013年 1月，40(1) 在 口腔医学领域中，金属材料被广泛应用于临 记录 结果 。细胞存 活率 = (D实验组／D对f}fii)× 床 ，牙科铸造合金在 口腔复杂的生物环境中存在许 100 ，实验重复 3次取平均值 ，绘制细胞存活曲线。 多影响金属材料稳定性的因素 。口腔中沉积的食物 实时荧光定量 (real—timePCR)检测 cyclinD1和 残渣和唾液 、温度的波动和 pH值的变化形成 了腐 survivin基 因转录水平 取对数生长期细胞，调整细 蚀的环境条件，使金属材料受到生物侵蚀 ，释放金属 胞浓度为 2×1()／mI接种于 6孔板 中，每孑L1mI， 离子 ，从而引起身体 的某些生物反应。其 中合金金 24h细胞贴壁后加入2mI不同浓度EGCG或Ni”， 属镍离子 (Ni)作为常用牙科铸造合金离子有 明 对照组加入等量培养基，培养 24h后收集各组细胞。 显的致癌作用 41。 总 RNA提取 ：Trizol法提取总 RNA，1．5 琼 对 于饮茶人群 ，国内外有较多关于表没食子儿 脂糖凝胶 电泳及紫外分光光度计 ，测定 D：／D ， 茶素没食子酸酯 (epigallocatechingallate，EGCG) 确定 RNA浓度及纯度为 1．8～2．0。 对肿瘤细胞 的生物学效应 的报道，但其与金属离子 cDNA合成 ：10 L逆转录体系：PrimeScript缓 共同作用后对肿瘤细胞的影响及相关的机制未见报 冲液 5 I，PrimeScriptRT 酶 Mix10．5 I，()ligo 道。本研究 目的在于了解 EGCG与牙科铸造 Ni dT Primer0．5 I，RNaseFreedH2O 5．5 I；总 对舌鳞癌细胞生长活性 的影 响，并进一步研究其对 RNA 1uL(0．52／g／J／L)。 , 有调节细胞周期作用 的cyclinD1及凋亡抑制蛋 白 后合成 cDNA。 IAP家族成员 survivin基 因表达的影响，从而为 口 realtimePCR：Primer5．0设计 引物 ：GAPDH 腔临床选用合金种类提供理论依据。 上游引物：CATCAAGAAGGTGGTGAAGCAGG； GAPDH 下游引物：AAAGGTGGA GGAGTGGG— 材 料 和 方 法 TGTCG；survivin上游引物 ：ATAGAGTGATAG GAAGCGTCTG；survivin下游引物 ：AGCATCG 实验材料 EGCG(美 国Sigma公司)；氯化镍 AGCCAAGTCAT；cyclinD1上 游 引物 ：CI、AGC— (NiCI，上海国药集 团化学试剂有 限公司，25()g)， AAGCTGCCGAACC；cyclinD1下游引物 ：TCCG— 试剂溶于去离子水中，配成待测液 ；MTT细胞增殖 AGCACAGGATGACC。realtimePCR反应体 系 及细胞毒性检测试剂盒 (南京凯基生物科技公司)； (20 L)：SYBRPrimixExTaq 1() L，正向弓I物 cyclinD1单克隆抗体，survivin单克隆抗体 (美 国 0．4 I，反 向弓l物 0．4 I，cDNA 2 I(0．1 g／ Abcam 公司)；PrimeScript逆转录试剂盒 ，SYBR L)，dH2O 7．2uI。95℃预变性 1()S，5