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酶法与高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的结果比对分析 　　摘要：目的 评估高效液相色谱法（HPLC）与酶化学法测定糖化血红蛋白的结果相关性和偏倚。方法 使用全自动糖化血红蛋白仪D-10采用高效液相色谱法和东芝TBA-120全自动生化分析仪以酶化学法分别测定40例EDTA-K2抗凝血液样本糖化血红蛋白，对结果进行分析比较；计算线性相关系数，直线回归方程和预期偏倚。结果 全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法的测定均值为7.78%，TBA-120全自动生化分析仪酶化学法测定均值为7.74%，线性回归方程为y=1.0349x-0.3111，r2=0.9923，无显著性差异（P0.05），糖化血红蛋白可接受偏倚大于预期偏倚可信区间上限。结论 酶化学法与高效液相色谱法结果相关性良好，可满足临床要求。 　　关键词：高效液相色谱法；酶化学法；糖化血红蛋白 　　糖化血红蛋白Alc（HbAlc）是反映血液中葡萄糖水平的一个中长期指标，国际上通常将其做为糖尿病血糖控制的金指标[1]。目前我室采用高效液相色谱法和酶化学法，为给临床提供可靠地检测结果，比较两种检测方法测定HbAlc的差异，探讨其可比性，现参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准的EP9-A2文件[2]，对其进行比较分析。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 收集我院住院患者糖化血红蛋白标本40例，均为EDTA-K2抗凝全血。 　　1.2仪器和试剂 高效液相色谱法：全自动糖化血红蛋白仪D-10及配套试剂标准品；酶化学法：日本东芝TBA-120全自动生化分析仪，试剂和标准品为九强公司提供的HbAlc测定试剂；质控品为美国Bio-Rad公司生产，批号为33860. 　　1.3方法 　　1.3.1精密度实验 根据NCCLS EP5-A文件的要求进行精密度实验。采用美国Bio-Rad公司的中值质控和高值质控。批内不精密度实验：同一天将2份质控品连续定20次；批间不精密度实验：将2份质控品测定1次/d，连续测定20d。 　　1.3.2方法学评价 以全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法为比较方法，将标本放置在样本架上直接自动进样测定；另一份标本以东芝TBA-120全自动生化分析仪酶化学法为试验方法，将九强HbAlc试剂中的a1和a2以7：3混合，作为前处理液，将标本混匀，吸取20μL溶于250μL的前处理液中，使红细胞溶解释放血红蛋白，将溶解液放进测试孔位进行测定，反应类型为一点法。依据EP9-A2文件的要求，8个/d标本在不同的分析批测定，将标本按照1～8和8～1的顺序做两遍，进行相关性分析和偏倚评估。 　　1.4数据处理 　　1.4.1离群点检验 将每一个标本经两种方法的前后两个测定值一一对应，依次求出差值，并计算出所有标本中的平均差值，以4倍的平均差值为判断限值。若仅有一个离群点，将之剔除，继续下述分析；如离群点超过2个，应分析原因，然后再另用标本补做。 　　1.4.2绘制散点图和偏倚图 以全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法的测定结果为X，东芝TBA-120全自动生化分析仪酶化学法测定值为Y，绘制散点图。可以直观的观察异常值、线性程度、偏倚。 　　1.4.3计算线性回归方程 y=a+bx和r2。 　　1.4.4临床可接受性判断 将b和a以及Xc（HbAlc）医学决定水平值[3]代入SE=|（b-1）Xc+a|，以SE是否小于或等于1/2CLIA88规定的允许误差（TEα）判断是否可接受。 　　1.5统计学处理 结果以均数±标准差（x±s）表示，显著性检验用t检验，使用SPSS20.0进行统计学分析。 　　2结果 　　2.1精密度评 按照临床实验室管理要求批内不精密度低于1/4 TEα，批间不精密度低于1/3TEα；经计算求得，糖化血红蛋白两种检测方法的批内CV均小于1/4 TEα（6.67%），批间CV均小于1/3TEα（6.67%），说明试验方法和比较方法的精密度符合要求，比对实验数据可靠，见表1。 　　2.2散点图和偏倚图 将40例标本所得的数据绘制成散点图和偏倚图。散点图以东芝TBA-120全自动生化分析仪酶化学法两次测定的均值为Y轴，比较方法以全自动糖化血红蛋白仪D-10高效液相色谱法两次测定的均值为X轴，见图1。偏倚图以两种方法两次测定均值的差值为Y轴，以高效液相色谱法两次测定的均值为X轴，以直线X=0为水平中线，见图2。 　　图1 D-10与TBA-120测定HbAlc的均值散点图 　　图2 D-10与TBA-120测定HbAlc的差值偏倚图 　　2.3离群点检验 经查方法内，方法间均无离群点。 　　2.4线性回归计算 y=1.0349x-0.3111，r2=0.9923，r20.95，说明两种方法相关