酵母菌产麦角固醇发酵工艺及发酵参数关系的研究.pdf

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 酵母菌产麦角固醇发酵工艺及发酵参数关系的研究 尚 飞， 王 玺， 谭天伟’ (北京市生物加工重点实验室北京化工大学生命科学与技术学院北京100029) 摘要：用一种在线监控乙醇浓度反馈脉冲式流加的方法高密度发酵生产麦角固醇，并对 发酵过程各种参数(pH。溶氧，乙醇浓度，摄氧率，二氧化碳释放速率，呼吸熵)进行分析。结 果发现根据发酵过程中乙醇体积浓度变化来调节流加糖的速率，并以氨水调节发酵过程pH 是一种有效的流加方案。各种过程参数之间的关系很好地反映了整个发酵过程的变化规 律。在5L发酵罐中，培养温度30℃，pH5．5，转速600rpm，发酵时间60h，控制乙醇体积浓度 1．o％以下，酵母生物量为1209／L，麦角固醇产量达到1500mg／L． 关键词：麦角固醇}酿酒酵母；生物量；分批补料发酵；乙醇浓度}发酵参数 麦角固醇是一种重要的化工产品，是生产脂溶性维生素D2以及各种甾醇类药物的 前体。麦角固醇是真菌细胞膜的重要组分，它在确保膜结构的完整性，与膜结合酶的活 性，膜的流动性，细胞活力及物质运输等方面起着重要作用[1]。目前我国生产麦角固醇 的主要方法有两种：一是利用发酵工业生产青霉素和柠檬酸等产品所剩余的废菌丝体中 提取麦角固醇。二是通过对麦角固醇高产菌株选育和发酵进行生产[2]。麦角固醇产量 主要由菌株的遗传特性和培养条件决定，国内已经报到了摇瓶培养产麦角固醇发酵条件 的研究[3商]，但是在发酵罐中分批补料培养生产麦角固醇的研究很少。高桦等[e3采用控 制溶氧的脉冲式流加方式，控制溶氧在12％左右，使得麦角固醇产量提高20％，麦角固 醇总量达到1100mg／L。由于酿酒酵母发酵产生乙醇，较高的乙醇浓度会抑制酵母生物 量的增长，很难达到酵母的高密度培养。所以发酵过程控制乙醇浓度是十分必要的。王 峥等[7]采用控制乙醇浓度流加方案发酵生产谷胱甘肽，使得谷胱甘肽产量达到1650mg／ L。本文采取控制乙醇浓度反馈脉冲式流加方案，对酿酒酵母高密度发酵以及过程中发 酵参数进行了研究。 1 材料与方法 1．1菌种和培养基 1．1．1菌种 酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)Y—E-1由本实验室保存。 1．1．2培养基 corn，Tel *通讯作者：谭天伟，E-mail：twtan(园mail．butt．edu．crl 412 第四次全国发酵工程学术讨论会 以100ml去水为基准： 斜面培养基：酵母浸出粉19，牛肉蛋白胨29，葡萄糖29，琼脂29，pH自然 种子培养基：酵母浸出粉19，牛肉蛋白胨29，葡萄糖29，pH自然 发酵培养基：葡萄糖69，玉米浆1．59，磷酸二氢钾0．69，无水硫酸镁0．39 流加培养基：葡萄糖609 1．2培养方法 1．2．1菌种活化 将保存菌种用接种环接人斜面培养基上，3013恒温培养48h。 1．2．2种子制备 温振荡培养18h。 1．2．3分批补料发酵 5L发酵罐中装液2．5L，无菌操作接种250m1种子液，接种量10％，培养温度30士0． 氨水系统成闭环回路，有计算机脉冲式补碱。根据乙醇浓度反馈控制流加培养基速率。 1．3分析方法 1．3．1菌体干重 移取5ml发酵液，在离心机中4000rpm离心10分钟，弃取上清液，将离心沉淀出的 酵母菌体取出至于烘箱中80℃烘至恒重。 1．3．2麦角固醇产量 水，25ml石油醚，剧烈震荡15min，静止分层后取上层萃取液lml，用石油醚稀释10倍， 计算按下述公式： (1) 麦角固醇产量(rag／L)CX-VX-FX-1000／Vo 麦角固醇含量％=呈笋*F*100％ (2) 式中：C·试样中麦角固醇浓度(mg／m1)，由标准曲线中查得；V一萃取溶剂体积25ml； W一酵母菌的生物量(mg／m