金丝桃素蛋白复合物抗口蹄疫病毒的实验研究.pdfVIP

实验研究 ‘7· 金丝桃素蛋白复合物抗口蹄疫病毒的实验研究 梁剑平1，李 蓉2，崔 颖1，尚若峰1，王学红1，华兰英1，罗永江1，王曙阳3 (1．中国农业科学院中兽医研究所兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州730050； 2．甘肃省药品检验所；3．兰州医学院) 摘要： 通过金丝桃素蛋白复合物对FMDV抑制作用及滴度检测、双抗捕获、同位素掺 入等方法研究表明，金丝桃素蛋白复合物对FMDV有明显的抑制作用．且与药物浓度呈阚值 现象。其作用机理，可能为抗宿主细胞的吸附、融合、病毒的复制、增殖及直接杀灭作用。 关键词：金丝桃素蛋白复合物；FMDV；作用机理 口蹄疫是发生于偶蹄兽的一种病毒性传染 1．1．3药物金丝桃素蛋白复合物由中国农科 病，国际兽医局将其列为第一位A类烈性传染 院兰州畜牧与兽药研究所从贯叶连翘中提取、分 离、纯化、合成(用HPLC测金丝桃素蛋白复合物 病，口蹄疫病毒(FMDV)的研究为动物病毒之 diseasevi一 含量达到药物的相关规定)¨1。溶予二甲基亚砜 首。口蹄疫病毒(‰t一蚰d—moutll 眦B，FMDV)属于小RNA病毒科FMDV属，完整 mg／ml，拉米夫定(每片 (DMSO)，原液浓度为100 病毒含有单股正链RNA，衣壳蛋白，无包膜。 含100 油(ZTO)含有莪术油0．4 金丝桃素是从贯叶连翘(H朋dcanpe咖聃- mffml葡萄糖注射液， turn L．)中提取的，为一种有光敏活性的萘骈二蒽 国药准字药物用细胞维持液稀释所 酮衍生物。临床应用证明。金丝桃素有愈伤，利 需浓度。‘ 尿，止血消肿，治疗神经衰弱和解除精神痛苦，抗 1．1．4仪器酶标测定仪Mode00；酶标测定 抑郁症等作用。近年来其抗肿瘤和抗病毒的研究 比较活跃。已试用于艾滋病的治疗。对包膜病引 镜；全波长紫外扫描仪：岛津uV一210IPC；离效液 起的急慢性感染具有较好的疗效，常用于肝炎病 相色谱仪：Water2695，二极管正列检测仪；液闪 毒、单纯疱疹病毒、水痘病毒和巨细病毒感染。在 DETAl450。 仪：Micro 细胞培养中具有抗逆转录病毒的作用。但国内有 1．2 方法 关金丝桃素抗病毒方面的报道较少。本试验旨在 1．2．1药物对BHK一21细胞的毒性试验通过 研究金丝桃素蛋白复合物对口蹄疫病毒杀灭作 细胞形态学观察，了解药物引起的细胞毒性作用。 用，及其作用机理。从而为研制新型抗病毒药物提 供理论依据。 定各孔中存活细胞增殖代谢情况及细胞毒性反 1材料与方法 应，不能使细胞产生CPE的药物最大浓度视为最 1．1材料 大无毒剂量。 1．1．1 细胞 叙利亚仓鼠肾细胞系(BHK一1．2．2体外抗病毒试验将BHK一21细胞接 21)。培养基采用MEM培养液(50％MEM。50％牛 种于小克氏瓶中，每瓶细胞悬液2ml。37℃5％ 乳蛋白质)，含10％(V／V)热灭活小牛血清，l％ h，待细胞长成单层时．弃去培 CO。恒温箱孵育48 谷氨酰胺。双抗(2万Il／