基因工程-3.2大肠杆菌克隆载体详解.pptVIP

第三章第二部分 大肠杆菌的克隆载体 Cloning Vectors for E. coli 所有克隆质粒中，最多的一类是以大肠杆菌为宿主的。 因为： 过去50年内，这种细菌在基础研究中一直扮演着中心角色； 已积累大量有关大肠杆菌的微生物学、生物化学和遗传学知识； 事实上所有关于基因结构和功能的基础研究都是以大肠杆菌为材料而开展的。 3.1 基于大肠杆菌质粒的克隆载体 基因克隆领域最得到广泛应用的也是最简单的，是那些以大肠杆菌质粒为基础而构建的克隆载体。 可用于大肠杆菌的有很多不同的质粒载体，其中有很大一部分是由商业公司提供的。他们开发的载体既易于纯化，又结合一些想要的特性，如高的转化效率、方便的转化和重组的筛选标志以及克隆相当大的DNA片段(高达8kb)的能力。 如：pBR322。pBR322是最早被构建的质粒，至今仍被广泛使用。 3.1.1 质粒克隆载体的命名法 “pBR322”这个名字符合载体命名法的标准规则： “p”说明它是一个质粒； “BR表示最初构建它的实验室(BR代表了两个构建人的名字：Bolivar和Rodriguez)。 “322把该质粒和该实验室构建的其他质粒区分开来(另外还有pBR325，pBR327，pBR328 3.1.2 pBR322的一些有用特性 从pBR322的遗传图谱和物理图谱(图6-1)可以看出为什么它能