使用GCxGC和Agilent7200GC.PDFVIP

使用 GCxGC 和 Agilent 7200 GC/ Q-TOF 对稻瘟病菌 Magnaporthe oryzae 进行非靶向代谢组学研究 应用简报 作者 William C. Ledford、 Margarita Marroquin-Guzman 和 Richard A. Wilson 植物病理学系 内布拉斯加大学林肯分校 Lincoln, NE USA Edward B. Ledford 和 Zhanpin Wu Zoex 公司 Houston, TX USA Qingping Tao 和 Stephen E. Reichenbach GC Image LLC Lincoln, NE USA Sofia Nieto 安捷伦科技公司 Santa Clara, CA 代谢组学 摘要 全二维气相色谱 (GCxGC) 可提供卓越的色谱分离度，与精确质量高分辨率质谱 (MS) 结 合使用时可大大促进复杂基质中的化合物鉴定和结构解析。利用 GCxGC/Q-TOF MS 在 配备 Zoex ZX2 热调制器的 Agilent 7890B GC 和 Agilent 7200 GC/Q-TOF 上进行非靶 向代谢组学研究，可对多种可能在稻瘟病菌 M. oryzae 的致病机理中发挥重要作用的代 谢物进行鉴定。 2实验部分 仪器 本研究采用 Agilent 7890B 气相色谱系统与 Agilent 7200 系列 GC/Q-TOF 系统联用（图 1）。GCxGC 系统（图 1 和图 2）使用 环形热调制器（ZX2 型，Zoex 公司，Houston, TX）。在低温下 每隔 6.8 秒对从第一维色谱柱洗脱的分析物谱带进行聚集、聚焦与 重新进样（调制阶段），从而将来自第一维色谱柱的一系列“切割 组分”注入第二维色谱柱，从而在每一调制阶段洗脱出第二维色 谱图。图 2 显示了热调制器的照片。Q-TOF MS 在电子轰击电离 (EI) 和正化学电离 (PCI) 模式下以每秒 50 张全扫描采集谱图的速 率采集第二维色谱柱洗脱物的精确质量数高分辨率谱图。仪器条 件列于表 1 中，GCxGC 的配置示意图如图 3 所示。 前言 由 Magnaporthe oryzae 真菌引起的稻瘟病是最严重的栽培稻 病害，也是对全球食品安全的巨大威胁，每年导致水稻作物减产 10%-30% [1,2]。这种稻瘟病随气候的变化不断蔓延到新的地区。 因此，迫切需要采取具有环境可持续性的稻瘟控制策略。而制定 这样的策略必须对 M. oryzae 的侵染过程有深入的了解。 除作为重要的植物病原体以外，M. oryzae 还具有许多与其他重 要谷物病原体相似的特性，使其成为开展广谱农作物病害控制研 究的最佳模型生物体 [2]。这些病原体具有共同的侵染机理，它 们利用形成于叶片表面的被称为附着胞的特殊细胞，并产生巨大 的静水膨压，从而使菌丝侵入下方的植物表皮细胞 [1]。 M. oryzae 所采用的定殖于水稻细胞的代谢策略基本上还不为人知。 本应用简报介绍了一项旨在揭示 M. oryzae 中养分吸收和利用的 研究，其可能有助于阐明侵染过程，并有助于确定有效病害治理 的新途径。本研究对 M. oryzae 的野生型 (WT) 菌株 (Guy11) 与 删除编码中心氮素调节因子(D?nut1)、碳调节因子 (D?mdt1)和碳- 氮代谢调节因子 (D?tps1) 的关键代谢调控基因后得到的非致病突 变菌株的代谢组进行了比较 [3]。 利用全二维气相色谱 (GCxGC) 与高分辨率精确质量数四极杆飞 行时间质谱 (Q-TOF MS) 相结合对 M. oryzae 的 WT 分离菌株与 三种非致病突变菌株的代谢组进行了比较。该方法揭示出可能在 M. oryzae 的致病机理中发挥作用的大量代谢产物。 图 1. 配备 Zoex ZX2 热调制器的 Agilent 7890B 气相色谱系统与 Agilent 7200 系列 GC/Q-TOF 系统联用 3样品前处理 使 M. oryzae 的野生型 (WT) 菌株以及 D nut1、D tps1 和 D mdt1 突变菌株在完全培养基中生长 48 小时，然后将菌丝体丛转移至基 础培养基的振摇条件下生长，其中 1% (w/v) 葡萄糖和 10 mM 硝 酸盐分别作为唯一的碳源和氮源。对菌丝组织样品进行收集和冻 干，并在液氮中研磨。使用甲醇:氯仿:水 (1:2.5:1, v/v/v) 的混合液 对代谢物进行提取。向各个样品中加入内标（d27-肉豆蔻酸）。将 提取物在真空下干燥并进行甲氧化衍生，然后采用 MSTFA + 1 % TMCS 进行硅烷化。 数据处理与统计分析 使用 Agilent