金黄色葡萄球菌感染前后奶牛乳腺组织中bta-miR-146a差异表达分析.pdfVIP

第 37 卷第 8 期 2016 年 8 月 家畜生态学报 Acta Ecologiae Animalis Domastici n 6 ρ h u · 唱 E A OO N2 归 忌 ， 町 、 u d.A V 金黄色葡萄球菌感染前后奶牛乳腺组织 中 bta-miR-146a 差异表达分析 王小龙，李 锐A ，毛永江，冀德君，杨幸平祷 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州 225009) [摘 要] 为了进一步探究 bta-miR-146a 的功能，利用 Real-time PCR 方法检测了 bta-miR- 146a 在中国荷斯坦奶牛金黄色葡萄球菌感染前后乳腺组织的表达差异， TargetScan 预测其 靶基因并进行 GO 和 Pathway 通路的富集分析以及靶基因功能分类。结果发现，感染组乳腺 组织中的 bta-miR-146a 表达水平显著低于对照组(PO.O日， bta-miR-146a 靶基因显著参与 了 Notch 信号传导通路和恶性肿瘤通路，以及 101 个 GO 功能分类;靶基因蛋白按功能分为 15 类，主要包括 C2H2 型铸指结构 (Zinc finger , C2 H2-type) 和免疫球蛋白亚型(1mmuno- globulin subtype) 。试验对 bta-miR-146a 组织表达及靶基因预测进行了初步分析，为今后细 胞水平上进一步开展试验进行系统地验证与分析 bta-miR-146a 的功能提供一定的理论参考。 [关键词] 奶牛; bta-miR-146的差异表达;靶基因 [中图分类号] 5811.5 [文献标识码] A 乳腺炎是奶牛乳腺组织内由于病原体(例如金 黄色葡萄球菌、链球菌等)的入侵而导致的一种持续 性的炎症反应，对奶牛业造成巨大的损失。奶牛乳 腺炎的感染过程中受到甲基化、 microRNA (miR- NAs)等分子调控[ld] ，因此从分子水平上研究乳腺 炎的免疫调控机制显得尤为重要。 miRNAs 是一类 广泛存在于动植物中长度约为 22 旧的非编码 RNA 分子， miRNAs 主要是通过与靶标 mRNA 的 3-UTR 区域完全或不完全配对从而降解靶标 mR- NA 或抑制 mRNA 的正常翻译，进而对基因转录后 表达进行调控[巧。 miRNAs 参与细胞生长、组织分 化等生物过程[4 飞并且在机体疾病调控过程中发挥 重要的作用[6-7J 。近年来，随着生物信息学和高通量 测序的迅速发展，许多学者对奶牛乳腺 miRNA 进 行了大量研究。 Gu 等[8J 利用克隆和测序技术在牛 乳腺组织中发现了 3 个新的 miRNA，同时通过核糖 核酸酶保护实验，验证了 13 个克隆测序高表达的 miRNA 在乳腺中有 10 个得以表达，且乳腺组织中 表达量与其他组织存在差异。 Li 等[9J 利用 Solexa [文章编号] 1005-5228(2016)08-0055-06 高通量测序技术在奶牛乳腺组织中发现了 96 条在 奶牛中尚未确认但在其他物种中保守的 miRNA，以 及 505 条 miRNA 候选序列。 Li 等问利用 Solexa 深度测序分析金黄色葡萄球菌感染后奶牛乳腺组织 的 miRNAs，发现有 77 个显著差异的 miRNAs; Naeem[叫对感染链球菌的奶牛乳腺组织的 miRNA 及其靶基因进行了研究分析，发现了几个可能参与 免疫调控的 miRNA，因此对那些在乳腺炎感染过程 中产生适应性变化的 miRNA 进行研究可以帮助我 们对乳腺组织感染炎症反应有更深入的理解。本课 题组前期利用金黄色葡萄球菌人工感染中国荷斯坦 奶牛乳腺，并通过 miRNA 的 Solexa 高通量测序结 合生物信息学分析筛选出一个关键 miRNA-bta- miR-146a[2J ，本研究通过 Real-time PCR 技术初步 验证与分析 bta-miR-146a 在金黄色葡萄球菌人工 感染前后乳腺组织中的表达水平，为今后进一步研 究 bta-miR-146a 的功能以及揭示引起奶牛乳房炎 的调控机制提供一定的理论基础。 [收稿日期] 2015-11-10 修回日期: 2015-12-12 [基金项目] 扬州大学研究生科研创新计划项目 3 江苏省高校自然科学研究项目(13阳B23000 1) [作者简介1 王小龙( 1980一) .男，江苏东台人，博士研究生，主要从事动物源性食品营养与加工工程方面研究。 E-mail: xlwang1218@126.com ; 6.并列第一作者。 铃[通讯作者] 杨章平1965一).男，江苏高邮人，博士、教授、博士生导师，研究方向为动物遗传资源的评价、保护和利用。 E-mail: yzp@ 56 家畜生态学报 第 37