第二章微生物分类及微生物基本汇总.pptVIP

第二章微生物的分类鉴定及微生物的 基本研究技术 研究微生物的基本技术手段 微生物的分类鉴定 第一节 微生物的基本研究技术 一、无菌技术 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污染的技术。 微生物培养的常用器具的灭菌 1. 试管、三角瓶、平皿、玻璃烧瓶等——高温干热灭菌：160-180℃ 2h 2. 培养基的灭菌——湿热灭菌 ：121 ℃ 15-30min 3. 接种工具—— 火焰灼烧 无菌操作——微生物学研究中最常用的基本操作。 培养基经灭菌后，用经过灭菌的接种工具，在无菌的条件下接种含菌材料于培养基上，这一操作过程称做无菌操作。 接种的微生物不能释放到环境中，防止环境污染。 二、染色技术 利用染料分子和细胞物质的亲和力，而使其牢固结合，使细胞呈现颜色，便于观察、鉴别细胞的形态结构。 染料是一种有机化合物，电离后形成带有正电荷或负电荷的染料离子。 微生物细胞表现出两性电解质的性质 根据电离后所带电荷的性质，染料分为： 1、酸性染料：带负电，与碱性物质成盐。如伊红、刚果红、苯胺黑、酸性复红等 2、碱性染料：带正电，如美蓝、结晶紫、孔雀绿、番红等 3、中性染料：酸性染料和碱性染料的结合，如吉姆萨染料 4、单纯染料：这类物质亲和力低，不能和被染物成盐，染色能力取决于能否溶于被染物。 染色的基本程序 制片→染色→水洗→干燥→镜检。 三、显微技术 显微镜是微生物研究中的不可缺少的工具。 显微技术是微生物学研究的重要技术和基础。 显微镜的种类： 普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、扫描电镜、透射电镜。 光学显微镜油镜的使用 （一）油镜的使用原理：??? 油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不清。 1. 香柏油的折射率与玻璃接近（n=1.52） ，提高了视野的照明度。 2 . 提高了显微镜的分辨率 D=λ/2n·sin(α/2 ) （二）油镜头的识别：  各接物镜的放大率可由其外形辨认，镜头长度越大，镜片直径越小，放大倍数大；反之，放大倍数小。油镜头长度大于低、高倍镜，镜头下缘一般刻有一圈黑线或白线，并刻有100×、1.25或oil等字样。 （三）油镜的使用法： 1、使用显微镜油镜时，必须将显微镜端正直立桌上，不得将镜臂弯曲，使载物台倾斜，以免香柏油流溢，影响观察，污染台面。 2、对光： 首先打开光圈，使光线集中于集光器。一般用低倍镜或高倍镜观察物象或用油镜检查不染色标本时，需下降集光器并适当地缩小光圈，使光度减弱；若用油镜检查染色标本时，光度宜强。应将显微镜亮度开关调至最亮，光圈完全打开，集光器上升至与载物台相平。  3、调焦距： A、将标本片放载物台上，用标本推进器固定，将欲检部分移至接物镜下。先用低倍镜找出标本的位置，然后提高镜筒，在标本的待检部位滴镜油一滴，再换油镜观察。 B、转动粗调节器使载物台徐徐上升（或使镜筒渐渐下降），直至油镜头浸没至油中。此时眼睛应从侧面观察，以免压碎标本片和损坏镜头。 C、然后双眼移至接目镜，一面从接目镜观察，一面反方向缓慢地转动粗调节器（下降载物台，或上升镜筒），当出现模糊物象时，换用细调节器，转动至物象清晰为止。 D、观察完毕，应先提高镜筒，并将油镜头扭向一侧，再取下标本片。 油镜头使用后，应立即用擦镜纸擦净镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，并随即用干的镜纸擦去残存的二甲苯，以免二甲苯渗入，溶解用以粘固透镜的胶质物，造成镜片移位或脱落 四、接种技术 接种技术是微生物学实验及研究中的一项最基本的操作技术。 接种是将纯种微生物在无菌操作条件下移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的培养基中。 为了获得微生物的纯种培养（指一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代），要求接种过程中必须严格进行无菌操作，一般是在无菌室内，超净工作台火焰旁或实验室火焰旁进行。 根据不同的实验目的及培养方式可以采用不同的接种工具和接种方法。 常用的工具有接种环、接种针、接种铲、玻璃涂棒，移液管及滴管等。 常用的方法有斜面接种，液体接种，穿刺接种和平板接种。 微生物的分离纯化技术是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。 分离纯化技术其实是进行平板接种，即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养达到。 平板接种的目的是观察菌落形态，分离纯化菌种，活菌计数及在平板上进行各种实验时采用的一种接种方法。 一、几个概念 单细胞挑取法 利用环境条件控制法 温度——嗜热菌、嗜冷菌 pH——耐酸、耐碱微生物 渗透