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答 辩 人: 专 业: 导 师: 论文框架 研究背景与意义 材料与方法 结果分析 结论 1 2 3 4 研究背景与意义 研究背景--茉莉酸信号转导途径相关基因的研究进展： 茉莉酸（jasmonic acid，JA）是一种广泛存在于自然界中的植物生长调节物质，是植物体内产生的天然化合物。JA不仅参与植物对机械伤害、病虫害等环境胁迫做出防御响应外，而且还参与植物的生长发育，调控种子的萌发和生长，花和果实及花粉的育性等。 JA信号转导是一个由多基因或多蛋白参与调控的复杂过程。 研究背景与意义 转录抑制因子JAZ（Jasmonate ZIM-domain）是茉莉酸信号从 SCFCOI1 受体复合物转导至下游JA应答基因的纽带。JAZ蛋白含有ZIM（又称TIFY）和Jas（又称CCT_2）两个保守的功能结构域。Jas结构域则介导JAZ与JA信号转导过程中转录激活因子MYC2结合并抑制其转录活性，进而抑制茉莉酸信号应答基因的表达。 研究背景与意义 研究意义： 茄子具有很强的杂种优势，利用杂种优势可以提高茄子产量、增强抗逆性、改良品质。雄性不育系作为母本生产杂种一代是利用茄子杂种优势的一种重要途径，其中花药不开裂是功能性雄性不育的表现形式之一。明确茄子雄性不育的发生机理，对利用杂种优势育种和创造茄子种质资源具有重要的理论意义与实践应用价值。 材料与方法 材料： 重庆市农业科学院蔬菜花卉研究所 提供的雄性不育系茄子材料F16-5-6，正常可育材料142。 材料与方法 方法： 材料与方法 方法步骤： 提取茄子花药总RNA→合成第一链cDNA→ 茄子JA基因的ORF区扩增（引物设计、PCR） →目的片段克隆载体的连接与转化（序列鉴 定及分析、提取重组质粒） 结果分析 1、茄子总RNA提取： 图 茄子花药总RNA提取检测电泳图 A：142；B：F16-5-6 Fig. 2-1 Total RNA of anther from Solanum melongena A:142; B:F16-5-6 结果分析 2、茄子JA信号转导途径JAZ1基因的ORF区克隆： 图 茄子花药RT-PCR 扩增结果 M：DNA 分子量标准；B: JAZ1 Fig. 2-2 RT-PCR amplification of anther from Solanum melongena M: DNA marker; A: JAZ1 结果分析 3、JAZ1基因的编码蛋白的生物信息学分析： 图2-7茄子JAZ1蛋白的二级结构分析 h：α-螺旋；c：不规则卷曲；e：β-折叠；t：β-转角。 Fig.2-7 Secondary structure analysis of JAZ1 of Solanum melongena h:alpha helix; c:random coil; e:bend region; t:beta turn 结果分析 图 茄子JAZ1蛋白的三级结构预测 Fig.2-8 Tertiary structure prediction of JAZ1 of Solanum melongena 结果分析 4、茄子JAZ1基因的定量表达分析 JAZ1基因在可育系142和不育系 F16-5-6花药中的表达量在总体上 变化趋势较为一致。从开花前4天 到花前1天，JAZ1基因在可育系142 和不育系F16-5-6花药中的表达量出 现先增高后减小再增高的变化趋势， 并且在142花药的增高量和减少量大致相当，而在花前4天，表达量基本一致，到花前2天，在不育系F16-5-6花药中的表达量达到最小。在开花当天，JAZ1在不育系F16-5-6花药中的表达量首次高于在可育系142的表达量，约为2倍左右，随着花蕾的开放，JAZ1基因在可育系142的表达量持续增高，并在花后3天达到最大值，JAZ1在不育系F16-5-6花药中的表达量同样在花后3天达到最大，为其2倍有余。 结论 （1）茄子JA信号转导途径JAZ1基因的克隆与分析： 克隆了茄子茉莉酸信号转导相关基因 JAZ1，其完整的ORF框长759 bp，由252个氨基酸残基组成。含有TIFY（ZIM）和CCT_2（Jas）两个保守的功能结构域。与番茄JAZ1基因的亲缘关系较近。 结论 （2）JAZ1基因的定量表达分析： 定量分析表明，在茄子花药的整个发育过程中，JAZ1在可育系和不育系花药开裂过程中的表达量有差异，JAZ1在不育系中的表达量持续增加，认为JAZ1导致了JA信号通路受阻，进而影响到茄子花药开裂。