唾液淀粉酶活力的测定.docVIP

唾液淀粉酶活力的测定 一、实验目的 了解并掌握唾液淀粉酶活力的测定方法 二、实验原理 唾液淀粉酶能催化水解淀粉，生成分子较小的糊精和麦芽糖。本实验利用碘的呈色反应来测定唾液淀粉酶水解淀粉作用的速度，从而测定唾液淀粉酶活力的大小。 三、实验仪器和试剂 1. 仪器 （1）多孔白瓷板 （2）50mL三角瓶 （3）恒温水浴锅 （4）烧杯 （5）500mL容量瓶 （6）100mL容量瓶 （7）漏斗 （8）吸管 2. 试剂 （1）原碘液：称取碘11g、碘化钾22g，加少量蒸馏水完全溶解后，定容至500mL，于棕色瓶中保存。 （2）稀碘液：吸取原碘液2mL，加碘化钾20g，用蒸馏水溶解，定容至500mL，于棕色瓶保存。 （3）标准“终点色”溶液 ①准确称取氯化钴40.2439g、重铬酸钾0.4878g，加蒸馏水溶解并定容至500mL。 ②准确称取铬黑T 40mg，加蒸馏水溶解并定容至100mL。 取①液80mL与②液10mL混合，即为终点色。冰箱保存。 （4）2％可溶性淀粉溶液：称取烘干可溶性淀粉2.00g，先以少许蒸馏水混匀，倾入80mL沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用蒸馏水定容至100mL。（需新鲜配制） （5）稀释100倍的唾液 用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，然后让唾液流入量筒并稀释100倍，混合备用。 （6）0.02mol/L、pH6.8磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液：称取磷酸氢二钠45.23g和柠檬酸8.07g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL，配好后用酸度计或精密试纸校正pH。 四、操作步骤 （1）将“标准色”溶液滴于白瓷板的左上角空穴内，作为比较终点色的标准。 （2）在50mL的三角瓶中，加入2％可溶性淀粉溶液20mL，加缓冲液5mL在37℃水浴中平衡约10min，加入0.5mL稀释唾液，立即记录时间，充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.25mL，滴于预先充满此稀碘液（约0.75mL）的调色板空穴内，当空穴颜色由紫色变为棕红色，与标准色相同时，即为反应终点，记录时间T（min）。 五、计算 1mL唾液淀粉酶于37℃、pH 6.8的条件下，1h液化可溶性淀粉的克数，称为唾液淀粉酶的活力单位。 酶活力单位=（60/T×20×2％×n）/0.5 n ——唾液淀粉酶稀释倍数 60 ——1h（60min） 0.5 ——吸取待测唾液淀粉酶的量（mL） 2％——淀粉浓度 20 ——2％可溶性淀粉溶液的量（mL） T ——反应时间（min） 六、注意事项 1. 全部时间应该控制在2～2.5min，否则应改变稀释倍数，重新测定。 2. 实验中，吸取2％可溶性淀粉及稀释唾液淀粉酶的量必须准确，否则误差较大。 Page 1 of 3