种子的扩大培养综述.pptVIP

第一章 种子的扩大培养 菌 种： 用于发酵过程作为活细胞催化剂的微生物，包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。 种 子：是指由菌种及其生长基质组成的繁殖材料。 种子培养过程 种子培养：是指提供给种子适宜的生长繁殖条件，使种子能迅速生长成合格的菌体的过程。一般包括孢子制备和菌丝种子制备两个过程。 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。 种子扩大培养的目的与要求： 种子扩培的目的： 接种量的需要、菌种的驯化、缩短发酵时间、保证生产水平。 种子的要求： 一、种子制备工艺及生产操作过程 种子制备分实验室种子制备和生产车间种子制备两个阶段。 实验室种子制备阶段： 琼脂斜面 固体培养基扩大培养 摇瓶液体培养 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用摇瓶液体培养法。孢子接入含液体培养基的摇瓶中，恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。 如：用灰色链霉菌生产链霉素 用卡那链霉菌生产卡那霉素 对于不产孢子的细菌，生产上一般采用将试管斜面菌种接入茄瓶斜面或摇瓶培养。 如：谷氨酸棒杆菌生产谷氨酸 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 二级发酵 霉菌：生长较慢，如青霉菌， 孢子悬浮液→一级种子罐（27?C,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（ 27?C,10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 三级发酵 放线菌：生长更慢，采用三级种子罐扩大培养 四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子。 二级发酵  种子罐1 发酵罐1 发酵罐2 种子罐2 1）单种：一个种子罐接种到一个发酵罐中。 2）双种：为加大接种量，两个种子罐接种到一个发酵罐中。 3）倒种：种子罐染菌又无备用种子时或种子质量不理想可采样倒种法，以适宜的发酵罐倒出部分给另一发酵罐。 4）混种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。 种子质量的控制措施 1、菌种的稳定性检查 2、适宜的生长环境（营养、温度、湿度、通气量） 3、种子无杂菌检查 生产发酵罐的无菌接种技术 生产规模发酵罐的接种，包括两个方面： 种子罐接种：从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器中移种入一个种子罐； 发酵罐接种：从一个种子罐移入另一个生产发酵罐中。 种子罐接种方法： 1、压差法（孢子悬液接种） 2、注射法 3、摇瓶直接进罐法 发酵罐接种方法： 1、压差法（种醪接种） 种子培养注意事项 1、严格无菌操作，避免染菌。 2、培养基、器皿、设备消毒灭菌要彻底。 3、保持环境卫生，防止杂菌滋生。 4、斜面菌种移接限三代以内。 5、培养工艺要因菌种而异。 6、加强培养工艺条件因素控制。 7、采取措施保持优良菌种的性能，防止死亡和变异。 8、及时对退化的菌种进行分离纯化和复壮。 9、压差移种时要防止接收罐表压降到零，以免染菌。 问题分析及处理手段 一、孢子培养过程中的影响因素 1、原材料质量 2、培养条件（温度、湿度、通气量） 3、斜面冷藏时间 4、孢子龄 5、接种量 培养时间和冷藏时间 （1）培养时间 一般来说，衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，核物质趋于分化状态。过于衰老的孢子会导致生产能力的下降。 措施：孢子培养的时间应该控制在孢子量多、孢子成熟、发酵产量正常的阶段终止培养。 （2）斜面冷藏时间 斜面冷藏对孢子质量的影响与孢子成熟程度有关。 如土霉素生产菌种孢子斜面培养4天左右即于4?C冰箱保存，发现冷藏7~8天菌体细胞开始自溶。而培养5天以后冷藏，20天未发现自溶。 冷藏时间对孢子的生产能力也有影响。 如在链霉素生产中，斜面孢子在6℃冷藏2个月后的发酵单位比冷藏1个月降低18%，冷藏3个月后降低35%。 孢子龄 过于年轻的孢子经不起冷藏，过于衰老的孢子生产能力下降。孢子龄以控制在孢子量多、成熟、效价正常的阶段为宜