2011 研究生3 PCR-STR实验幻灯片.pptVIP

医学遗传学教研室Department of Medical Genetics 实验三 聚合酶链反应-短串联 重复序列分析技术 PCR-STR 医学遗传学教研室Department of Medical Genetics   掌握PCR-STR实验原理及实验方法 熟悉PCR-STR分析技术的应用 一 实验目的 1.DNA多态性 指染色体DNA等位基因(或片段)中核苷酸排列存在两种或两种以上的差异性 产生机制　点 突 变 ＤＮＡ序列多态性 　　 插入或缺失ＤＮＡ长度多态性 存在部位　编 码 区 非编码区 二 实验原理 2. DNA遗传标记 是个体特异的碱基序列 　 遵循孟德尔遗传规律遗传 　 具有终身不变的遗传特征 3. DNA指纹(DNA fingerprint ) 通过获得相关个体DNA片段(或等位基因)图谱用于个体鉴定的一种技术 以完全个体特异的DNA多态性为基础，其个体识别能力足以与手指指纹相媲美，极少有两个人完全相同，故称为“DNA指纹” 可用来进行个体识别及亲权鉴定等 1984年英国莱斯特大学遗传学家Jefferys 首次将人源小卫星DNA用作基因探针 与人gDNA酶切片段杂交，获得多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹 这种图纹同人的指纹一样极少有两个人完全相同，故称为“DNA指纹” DNA指纹图像在X光胶片中呈一系列条纹，如同商品上的条形码 DNA指纹图谱，开创了检测DNA多态性的多种多样的手段，如RFLP分析、串联重复序列分析、RAPD分析等 各种分析方法均以DNA的多态性为基础，产生具有高度个体特异性的DNA指纹图谱 由于DNA指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性，且仍按简单的孟德尔方式遗传，成为目前最具吸引力的遗传标记 4.三代DNA遗传标志DNA指纹 a.RFLP b.STR(short tandem repeats), VNTR(variable number of tandem repeats) c. SNP(single nucleotide polymorphism) 短串联重复序列（short tandem repeats, STR) 特征：重复单位2bp-6bp 不宜用RFLP方法分析 　 实质也是一种VNTR PCR扩增没有优势扩增 重复次数5次-60次，总序列长度400bp 微卫星DNA 适用于降解DNA的鉴定 最常见是二核苷酸，法医常用的是四核苷酸重复 必须用高分辨率的电泳方法分离 分布广泛，人类基因组的5%，估计20-50万个 检出8000多个，遗传标记数目多 绝大多数分布非编码区，极少三核苷酸位于编码区 由于DNA指纹的高度特异性和稳定性，世界各国目前已经在罪犯确认、血亲鉴定、确定遇难者身份等方面广泛使用这种技术 它在人类医学中还被用于医学诊断及寻找与疾病连锁的遗传标记 在动物进化学中可用于探明动物种群的起源及进化过程 在物种分类中，可用于区分不同物种，也有区分同一物种不同品系的潜力 在作物的基因定位及育种上也有非常广泛的应用 本实验分别选用人X染色体特异性位点DXS101和Y染色体特异性位点DYS19 为扩增对象 用于鉴定性别，并可根据其多态性进行初步的亲子及同胞关系鉴定 三、实验设计 DXS101 chrX:101413016+101413242 227bp ACTCTAAATCAGTCCAAATATCTcccttcaaaaacaaagataatacacacatattcattttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttcttattattattattattattattattattattattattattatactttaagttctgggatacatgcgcagaatatgcaggtttgttacataagtATACATGTGCCA