菊属植物花粉生活力检测方法的比较.pdfVIP

浙 江 林 学 院 学 报 2006，23(4)：406～409 Journal of Zhejiang Forestry College 文章编号：1000．5692(2006)04．0406．04 菊属植物花粉生活力检测方法的比较 赵宏波，陈发棣 ，房伟民 (南 京农 业大学 园艺学院 ，江苏 南京 210095) 摘要：利用碘．碘化钾法、氯化三苯基 四氮唑(TrC)法及 改进 TrC法、无机酸法、荧光染 色 法、离体 萌 发 法、活 体 萌 发 法 测 定 了 菊 属 Dendranthema 植 物 菊 花 脑 Dendranthema nankingense，南京野 菊 Dendranthema indicum，毛华 菊 Dendranthema vestitum 和栽培 小菊品种 rm43．2，rm46．1，rm48．2的花粉生活力。结果表明：碘．碘 化钾 法、rItrC法及改进 rItrC法、无 机酸法和荧光染色法都不适合菊属植物花粉生活力的检测；活体萌发法检测菊属植物花粉生 活力不准确，但能有效表述花粉萌发力；离体萌发法能有效快速地测定花粉生活力，适合菊 属植物花粉生活力的检测。图 l参 ll 关键词 ：植物学；栽培小菊；菊属植物；花粉活力；检测方法 中图分类号 ：Q944．42；$682．1 l 文献标识码 ：A 花粉是种子植物的雄配子体 ，在有性 繁殖 中扮 演着重要 角色。杂交育种 在菊花 Dendranthema × grandiflor0育种 中仍是最有效的手段?。进行菊属 Dendranthema野生种和栽培小菊的花粉生活力测定 对指导菊花育种具有重要的理论和现实意义 。测定花粉生活力有很多方法 ，主要包括染色法 、离体萌 发法和活体萌发法等 3类 ，其 中根据原理不 同染色法 又包括氯 化三苯 基 四氮 唑 (triphenyltetrazolium chloride．rItrC)法、碘．碘化钾法、联苯胺法 、荧光染色法等。每种方法都有不 同的使用范围，不同特 性的花粉应选择不同的方法。该研究用碘．碘化钾法、rItrc法及改进 rItrc法、无机酸法、荧光染色法、 离体萌发法和活性萌发法对几种不同倍性菊属植物(二倍体，四倍体和六倍体)和栽培小菊品种花粉生 活力进行测定，以期筛选出一种或几种快速准确地测定各种菊属植物和菊花材料花粉生活力的方法。 1 材料和方法 1．1 材料 实 验 材 料 为 不 同倍 数 性 的 菊 属植 物 菊 花 脑 Dendranthema nankingense(二倍 体 )，南 京 野 菊 Dendranthema indicum(四倍体)，毛华菊 Dendranthema vestitum(六倍体)和 3个栽培小菊品种(rm43．2， rm46．1，rm48．2)的花粉。所有材料均取自南京农业大学菊花种质资源保存中心。 1．2 方法 1．2．1 碘．碘化钾法 配制碘．碘化钾溶液：将 1．3 g碘化钾溶解在水中，再加入 0．3 g碘结晶，然 收稿日期：2005．11-23；修回日期：2006．O1．06 基 金项 目：国家 自然科学基金 资助项 目；江苏省 教育厅 高技 术产业化 研究项 目(JH02．086)；江苏省 科 学技术厅高技术研究项 目(BG2003305)；上海市农业委员会重点攻关项 目[(2004)D3．1] 作者简介：赵宏波，博士研究生，从事观赏植物遗传育种研究。E-mail：zhaohbzhou@yahoo．corn。通讯作者：陈发 棣，教授 ，博士生导师，从事观赏植物遗传育种研究。E-mail：ehenfd@mail．njau．edu．cn 第 23卷第4期 赵宏波等：菊属植物花粉生活力检测方法的比较 后定容到 100 mL。取少量花粉置于凹载玻片上，滴上2滴碘 碘化钾溶液，置于30℃恒温箱中20～30 min后，有 Olympus相差显微镜下观察。有生活力的花粉染成蓝色，生活力衰弱或内含物少的花粉成 黄褐色 。 1．2．2 r兀C法 ?及改进 r兀C法 用 0．15 mol·L Tris HCI(pH6．5)缓 冲液配制 10 g·L 的 r兀C溶液 ； 改良r兀’c溶液为在 r兀’c溶液中加人200 g·L～PEG 4 000。取少量花粉置于凹载玻片上，加人2滴 r兀’c 溶液或改良r兀’c溶液，放在 35℃恒温箱中，染色 l5～20 min后，在显微镜下观察，有生活力的花粉 呈红色 。 1．2，3 无机酸法 取少量花粉置于凹载玻片上，滴上 1滴0．8 mol·L 的硝酸，在 5～10 min内在显 微镜下观察。有生活力花粉的胞质内含物喷射而出形成瞬时花粉管。 1．2．4 荧光染色法 用 0．5