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第十五章 生物技术与作物育种 第一节 细胞工程与作物育种 植物细胞工程：是以植物组织和细胞培养技术为基础发展起来的一门科学。 它以细胞为单位，在体外（in vitro）条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿生产某种物质过程。包括花药培养、体细胞变异筛选、幼胚培养、试管受精和原生质体融合等 理论基础： 细胞的全能性（cell totipotency）。指细胞所具有的形成各种细胞类型的潜在能力。因为细胞核内有保持物种遗传性所需要的全套遗传物质所以高度分化的体细胞具有发育成一个生物体的能力。 一、植物细胞和组织培养技术 （一）培养基及其组成 1、培养基的种类和特点 （1）MS培养基 （2）B5培养基 （3）White培养基 （4）N6培养基 （5）KM-8p培养基 （6）SH培养基 2、培养基的成分 无机盐和水 大量元素 C.H.O.N.P.K.Ca.Mg.S.Cl 微量元素 Fe.Cu.Mo.Zn.Mn.Co.B.Na 水 蒸馏水、双蒸水或使用去离子水 有机化合物 糖 碳源和能源 氨基酸类 有机氮源 维生素类 维生素b1(盐酸硫胺素)、维生素b6(盐酸砒哆醇)、生物素、烟酸、叶酸等 生长调节物质 生长素 IAA、NAA、2,4-D、IBA 细胞分裂素 天然： 6-BA、KT（激动素，糠基酰嘌呤） 人工：ZT（玉米素）、2-iP 赤霉素 GA3 成份不定物质 椰乳、酵母提取物、番茄汁、香蕉泥 琼脂 从海藻中提取的一种高分子碳水化合物 3、培养基的配置 (1)水和药品 水必须采用蒸馏水或无离子水，药品最好采用分析纯，至少是化学纯药品。 (2)母液的配置 为方便培养基的制备，现将培养基的各种成份分类配成浓缩的母液，正式配制时按规定用量稀释混合。 (3)制备培养基 混合各成分母液 熔化琼脂 (4)培养基的消毒 主要有高温高压灭菌和过滤灭菌两种方法。 调pH值 分装 灭菌 放置备用 搅拌混匀 4、无菌操作方法 （1）消毒剂 消毒剂 使用浓度（%） 消除难易 消毒时间（min） 消毒效果 次氯酸钠 2 易 5~30 很好 次氯酸钙 9~10 易 5~30 很好 过氧化氢 10~12 最易 5~15 好 溴水 1~2 易 2~10 很好 硝酸银 1 较难 5~30 好 氯化汞 0.1~1 较难 2~10 最好 抗生素 4~50mg/L 中 30~60 较好 （2）无菌操作 （3）无菌培养 二、细胞和组织培养与作物育种 （一）体细胞克隆变异及其育种利用 1、体细胞克隆变异的遗传基础 （1）染色体数目变异 （2）染色体结构变异 （3）点突变 2、突变体的筛选 3、在作物改良上应用 （1）抗病 （2）抗除草剂 （3）抗氨基酸或氨基酸类似物 （4）耐盐 （5）耐旱 优良品种 细胞培养 R0 R0群体 改良体细胞克隆 确定遗传方式 遗传稳定性测试 田间试验 育种新品系 多点田间试验 区域试验 继续田间试验、种子富集 审定 投入生产 利用体细胞克隆变异技术路线 （二）单倍体细胞培养及育种利用 1、单倍体细胞培养在遗传和育种中的应用价值 （1）后代的快速纯合 （2）提高选择效率 （3）排除杂种优势对后代选择干扰 （4）遗传研究的良好实验材料体系 （5）突变