納洛酮影响大鼠心脏缺血后处理保护作用.pptVIP

纳洛酮影响大鼠心脏缺血后处理保护作用 刘光军 胡烨文 黄晓洁 黄美霞 浙江大学医学院临床一系2班第五组 实验背景 20世纪80年代中期，Murry等提出心肌在经受多次短暂缺血再灌后，能减少心肌损伤，且已被很多实验证实。其中很多文献都证实阿片受体在其中的重要作用。 阿片受体的机制 阿片受体 G蛋白 PKC KATP channels HSP 70 Ca 2+overload Ischemia-induced Myocardial injury 纳洛酮 纳洛酮是一种特异性的阿片受体阻滞剂,但较大剂量时可对细胞直接作用,产生膜稳定性等效应,而与阿片受体无关。 实验目的 缺血后处理的保护作用（有 OR 无） 阿片受体参与保护作用？（用纳洛酮来验证） 实验分组 ischemia 30min reperfusion 30min Control Postcond Nal Nal+post 6s 6times 10 只/组 心脏灌流 心室动力学指标 压力换能器 ±dP/dtmax LVEDP LVDP RPP 酶学指标 乳酸脱氢酶（LDH）的测定： 取缺血前，rep5min，rep10min，rep20min冠脉流出液 每样本两管 各50μL 基质250μL 37℃孵育3min 加H2O 50μL 37 ℃ 15min 加辅酶I 50μL 37 ℃ 15min 37 ℃孵育15min 2，4-二硝基苯肼250μL 0.4mol/L NaOH2.5mL 静置3min 440nm 测吸光度 心肌线粒体渗透性转换孔道(MPTP)的开放程度 心脏剪碎匀浆 4 ℃ 1000 g离心 10 min 取上清液4 ℃ 8000 g离心10 min 取沉淀重悬液重悬 再次4 ℃ 8 000 g 高速离心10 min 取沉淀重悬液中行考马斯亮兰蛋白测定法测定蛋白含量 肿胀液稀释至 0.25 g/L 蛋白 质浓度 200 ?mol/L 和1mmol/l的CaCl2分别作用于线粒体，连续观察在520 nm处线粒体吸光度的变化 LDH数据表 IR Postcond Nal Nal+Postcond Baseline 49.7±11.29 50.25±18.38 46.25±10.62 27.81±9.13 Rep5 71±10.99 43.18±7.752 53.68±24.24 42.16±13.04 Rep10 86.6±32.48 48.18±16.76 42.75±3.802 53±12.129 Rep20 34±7.0710 44.43±7.797 49.5±18.789 Fig1 不同实验处理下不同时间点冠脉流出液LDH含量 Fig2 各组心脏缺血后复灌10分钟灌流液LDH含量统计图 (与Postcond组比较*P0.05，与Nal+IR组比较，*P0.05) Fig3 不加钙组吸光度比值随时间变化图（每隔30秒测一次） Fig4 不加钙组15分钟末吸光度比值统计图 （各组t检验比较均无显著性差异） Fig5 低钙组吸光度比值随时间变化图 (每隔30秒测一次，2min 后滴加200 ?mol/L 钙溶液) ％ Fig6 低钙组15分钟末吸光度比值统计图 (与IR组比较*P0.05，与Nal+Postcond组比较，*P0.01) Fig7 高钙组吸光度比值随时间变化图 (每隔30秒测一次，2min 后滴加1 mmol/L 钙溶液)