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紫外—可见分光光度法简介 紫外—可见分光光度法的特点 物质对光的选择性吸收 影响紫外—可见吸收光谱的因素 朗伯——比尔定律 紫外—可见分光光度计 紫外—可见吸收光谱的应用 紫外—可见分光光度法 在仪器分析中紫外—可见分光光度法是历史悠久、应用最为广泛的一种光学分析方法。他是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析，所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外—可见分光光度法。 分光光度法是在比色法的基础上发展起来的，两者所依据的原理基本上是相同的。由于分光光度法采用了更为先进的单色系统和光检测系统，使得分光光度法在灵敏度、准确度、精密度及应用范围上都大大的优于比色法。 紫外—可见分光光度法有如下特点： 相对其他光谱分析方法来说 相对其他光谱分析方法来说，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度较快。 灵敏度较高。如在紫外区直接检测抗坏血酸时，其最低检出浓度可达到10-6g/mL。 有较好的选择性。通过适当的选择测量条件，一般可在多种组分共存的体系中，对某一物质进行测定。 精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条件较好的情况下，其相对误差可减小到1%~2%。虽然相对误差比重量法和滴定法大，但对于微量组分的测定已经满足要求。 用途广泛。在医药、化工、冶金、环境保护、地质等诸多领域，紫外—可见分光光度法不但可以进行定量分析，还可以对被测物质进行定性分析和结构分析，进行官能团鉴定、相对分子质量测定、配合物的组分及稳定常数的测定等等。 物质对光的选择性吸收： 量一种物质的吸收光谱，用经过分光后的不同波长的光依次透过该物质，这种物质可以是液体，也可以是固体或气体，但大多数情况都是具有一定浓度的溶液。通过测量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该物质在测量波长范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光度吸收能力，称为吸收光谱。 在分子发生电子能级跃迁的同时，总是伴随着振动能级和转动能级的跃迁。所以，在分子的电子光谱中，包含有不同振动能级跃迁产生的若干吸收谱带和转动能级跃迁产生的若干吸收谱线。一般情况下由于 ,分辨不出电子光谱中振动能级和转动能级跃迁所产生的谱线结构，观察到的只是这些谱线展宽后合并在一起形成的较宽的吸收带。所以通常又将分子的电子光谱称为带状光谱。 有机化合物的紫外—可见吸收光谱 1 有机化合物的电子跃迁 有机化合物的紫外吸收光谱，取决于分子中外层电子的性质。与紫外—可见吸收光谱有关的电子有三种，即形成单键的σ电子、形成双键的π电子以及未参与成键的n电子（孤对电子）。处于基态的分子在吸收一定波长的光后，分子中的成键电子和非键电子可被激发跃迁至σ* 和π* 反键轨道，其跃迁类型有σ→σ*、n→σ*、π→π*和n →π*四种，其相对能量大小次序为： σ→σ* n→σ* π→π* n →π* 有机物最有用的吸收光谱是基于n →π*和π→π*跃迁而产生的，这两类跃迁所需要的辐射能量大多处于波长大于200nm的区域。它们要求分子中含有不饱和键，这种含有不饱和键的基团称为生色团。 n →π*跃迁发生在含有杂原子的不饱和化合物中，其最大摩尔吸光系数εmax （表示物质对光吸收能力大小的参量）比较小，吸收峰随溶剂极性增加而向短波方向移动，即产生蓝移，下表列出了一些常见生色团n →π*跃迁的吸收特性。 生色团 化合物 溶剂 羰基 正己烷 280 16 羧基 乙醇 204 41 硝基 CH3NO2 异辛烷 280 22 亚硝基 C4H9NO 乙醚 665 20 π→π*跃迁可以发生在任何具有不饱和键的有机化合物分子中，其最大摩尔吸光率很大，吸收峰随溶剂极性增加向长波方向移动，即产生红移。下表列出了一些常见生色团π→π*跃迁的吸收特性。 生色团 化合物 溶剂 羰基 正己烷 188 900 烯 正庚烷 177 13000 炔 正庚烷 178 10000 当一个分子中含有两个或两个以上的生色团时，按相互间的位置可以分为共轭和非共轭两种情况：非共轭时，各个生色团各自独立吸收，吸收带由各生色团的吸收带叠加而成；共轭时，生色团原有的吸收峰会发生改变，可产生新的吸收峰。下表列出了一些有关共轭结构的化合物的吸收特性。 化合物 共轭双键数 1 195 5000 2 200 10000 2 217 21000 3 254 25000 3 258 35000 另有一些基团，本身并不产生吸收峰，但与生色团共存于同一分子时，可引起吸