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9第十章 外
第十章 紫外-可见分光光度法
教学目的、要求:掌握:紫外-可见分光光度法的基本原理和概念;比尔-朖伯定律;紫外-可见分光光度计;外-可见吸收光谱法的定性分析和定量分析方法及其应用;紫外吸收光谱与有机分子结构的关系。熟悉:吸收带及与分子结构的关系;吸光系数的概念及物理意义;紫外-可见分光光度计的类型。了解:吸收带的影响因素;紫外-可见分光光度计的光学性能;光电比色法Beer-lambert定律。
教学重点及难点:重点:紫外-可见分光光度法的基本原理和概念。难点:吸收带及与分子结构的关系。Beer-lambert定律。
第一节紫外-可见分光光度法的基本原理和概念
一、光谱法简介
1.分类 根据物质发射的电磁辐射或与辐射的相互作用建立起来的一类仪器分析方法,统称光学分析法。光学分析法根据物质与辐射能作用的性质不同,可分为光谱法和非光谱法。当物质与辐射能相互作用时,物质内部发生能级跃迁,记录由能级跃迁所产生的辐射能随波长的变化所得的图谱称为光谱。利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光谱分析法,简称光谱法。如紫外-可见吸收光谱法和红外吸收光谱法等。利用物质受辐射线照射时,改变电磁波的传播方向、速度等物理性质所建立起来的分析方法称为非光谱法,如折射分析法、旋光分析法等。
按物质与辐射能的转换方向(能级跃迁方向),可分为吸收光谱法与发射光谱法。如紫外-可见分光光度法,红外分光光度法和原子吸收分光光度法等。常见的发射光谱法有原子发射光谱法、原子荧光光谱法、分子荧光光谱法和磷光光谱法等。
按作用物质是分子或原子,可分为原子光谱法与分子光谱法。原子光谱法是以测量气态原子或离子外层电子能级跃迁所产生的原子光谱为基础的成分分析方法。分子光谱法是以测量分子中原子的振动能级(包括分子转动能级)、 分子转动能级和分子电子能级(包括振-转能级)跃迁所产生的分子光谱为基础的定性、定量和物质结构分析方法。
按辐射源的波长,可分为X-射线光谱法、紫外光谱法、红外光谱法等。
2.光的性质与波长范围 光是一种电磁波,又称电磁辐射,是能量在空间高速传播的一种形式。光具有波粒二象性。
C是光在真空中的传播速度,所有电磁辐射在真空中的传播速度相同,C=2.997925×1010cm/s 光的微粒性用每个光子具有的能量E描述,光子被认为是辐射能的最小单位。光子的能量与、和的关系为:
式中,E是光子的能量,单位常用焦耳(J)和电子伏特(eV);h是普朗克(Plank)常数,其值为6.6262×10-34J﹒s。
由上式可知,光子具有的能量E与频率ν成正比而波长λ成反比。
从γ射线至无线电波都是电磁辐射,光是电磁辐射的一部分,它们在性质上是完全相同的,仅是波长λ或频率ν不同,即光子具有的能量E不同。若把电磁辐射按波长大小顺序排列起来,称为电磁波谱。光学区域从红外线到X射线(表3-1),包括:X射线、远紫外区(100~200nm)与近紫外区(200~400nm)、可见区(400~760nm)、近红外区(0.76~2.5μm)、中红外区(2.5~50μm)与远红外区(50~500μm)。通常所说的紫外吸收光谱指近紫外光谱,红外吸收光谱指中红外光谱。
3.光谱分析仪器 研究吸收或发射的电磁辐射强度和波长关系的仪器称为分光光度计(spectrophotometer),如荧光分光光度计、紫外-可见分光光度计等。这一类仪器都有三个最基本的组成部分:①辐射源,即光源;②把光源辐射分解为“单色”组分的单色器;③检测器和显示器。
(二)紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法是根据物质分子对紫外-可见光的吸收特性所建立起来的一种 定性、定量和结构分析方法。紫外-可见光的波长范围为200~760nm。该法操作简单、准确度高、重现性好,在药物分析工作中普遍应用。
目前应用紫外-可见分光光度法,在定性上不仅可以鉴别不同官能团和化学结构不同 的化合物,而且可以鉴别结构相似的不同化合物;在定量上,可以进行单一组分的测定,也可以对多种混合组分不经分离而进行同时测定。此外,还可以根据吸收光谱的特性,与其他分析方法配合,用以推断有机化合物的分子结构。
二、基本概念
(一)跃迁类型
紫外-可见吸收光谱是讨论分子中价电子在不同的分子轨道之间跃迁的能量关系。分子中的价电子有处于б轨道的б电子,轨道上的电子和未参与成键而仍处于原子道中的n电子(亦称p电子)。电子围绕分子或原子运动的几率分布叫做轨道。轨道不同,电子所具有的能量亦不同。当两个原子靠近而结合成分子时,两原子的原子轨道可线性组合成两个分子轨道。其中一分子轨道具有低较能量称为成键轨道,另—个分子轨道具有较
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