第二章遗传的物质基础试卷.pptVIP

第二章 遗传的物质基础--DNA;掌握DNA一级结构组成特点，理解双脱氧终止法测序的基本原理及过程（难点）； 掌握DNA二级结构的特点，理解分子杂交的原理（重点），了解基因芯片的原理及用途； 掌握DNA的高级结构的特点，理解拓扑异构体转变的生物学意义（难点）。 ;第一节、遗传物质是DNA或者RNA;第二节、核酸的分子结构 ;DNA的二级结构;DNA的三级结构;第一节、遗传物质是DNA或者RNA;Griffith等的肺炎链球菌的转化实验;Avery等的单因子转化实验;Hershey和Chase的噬菌体感染实验 ;RNA也是遗传物质的证据 ;RNA 病毒重建实验;蛋白质是否是遗传物质的争论 ;朊病毒致病的“蛋白质构象致病假说” ;第二节、核酸的分子结构 ;DNA的一级结构是由脱氧核糖核苷酸通过3’→5’磷酸二酯键连接而成的高聚物。;基本单位：脱氧核苷酸;RNA分子核苷中的核糖为2’为非脱氧的OH基;DNA的4种含氮碱基;;;DNA一级结构???特征：;DNA一级结构测定;末端终止法（双脱氧法）测序：Sanger设计;;Fluorescent DNA sequencing;;测序仪输出的结果图;;DNA的二级结构;DNA双螺旋结构指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。;DNA双螺旋结构的主要特征;DNA分子中的脱氧核糖和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在内侧。;两条链上的碱基通过氢键相结合，G与C配对，A与T配对。;DNA双螺旋的表面形成两条凹槽，一条宽而大，称为大沟，另一条小而窄，称为小沟。;大沟和小沟对于调控蛋白识别DNA双螺旋结构的特定信息非常重要。;影响双螺旋结构稳定性的因素;;磷酸酯键（phosphodiester bond）;带负电荷的磷酸基团的静电斥力;碱基堆积力（Base stacking forces）;DNA二级结构的多形性;B-DNA;双螺旋;右手螺旋DNA;DNA的变性、复性、杂交;常用的DNA变性方法;增色效应：当DNA分子加热变性后，其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象。;220;光吸收法是测定DNA和RNA浓度和纯度;纯度：;RNA：A260/A280=2.0； 若比值＞2.2，说明RNA已经水解成单核苷酸;Tm （melting temperature）： DNA的变性温度、融点或融解温度，是指消光值上升到最大消光值一半时的温度。即50%DNA分子发生变性，即熔解曲线中点对应的温度。;影响DNA分子热变性Tm值的主要因素;DNA分子的碱基排列;DNA片段的大小;变性剂的影响;盐浓度;pH;但磷酸二酯键仍保存完整;DNA分子的复性（renaturation），也称重退火（reannealing）：;;分子杂交;;核酸探针及标记;核酸分子杂交的应用;Western blot---以亲和或免疫反应检测蛋白的蛋白质印迹方法。;Southern Blot; Northern Blot; Hybridization in situ; Microarray：DNA微阵列技术;;;检测基因表达水平及识别基因序列 检测表达状况，发现新基因 检测突变和多态性进行遗传作图 DNA序列分析;DNA的高级结构;负超螺旋 ;相同序列的DNA可以有不同的连环数，这反映了超螺旋程度的差异，仅连环数不同的DNA分子称为拓扑异构体。;;DNA拓扑异构体之间的转化要在拓扑异构酶的作用下通过链的断裂和连接来完成。 拓扑异构酶I：只作用于一条链，不需要ATP。;;拓扑异构酶II：同时断裂并连接DNA链，需要ATP。;DNA拓扑异构化是DNA复制和转录过程所必须的。;;总 结;思 考 题