蛋白质与酶学教学 第五章 酶学理论.pptVIP

第五章 酶学理论;第一节 酶与应用酶学一、酶学研究概况;二、从分子水平研究酶的结构与功能 （一）酶的分子结构 在Brookhaven Protein Data Bank 中已有的近万个结构中，有近四千个是酶的结构，其中绝大多数是晶体结构。由于多标记和多维技术的发展，使得用NMR方法解出酶的分子结构成为可能。;（二）结构与功能的研究 研究结构最难的是研究酶的动态结构，如何追踪酶的动态变化仍然是至今没有很好解决的大问题。现在采用“停留法”是以毫秒计，而使用温度或其他跃迁方法虽可以把时间分辨提高到微秒水平，但仍很难真实地观察酶的动态结构。;酶的结构与功能研究是酶学研究的核心问题，长期以来主要集中在化学结构与功能关系的研究上，20世纪80年代，出现了基因定点突变技术，可以很方便地采用分子生物学的方法研究酶的结构与功能的关系。90年代，开展了酶的空间结构与功能关系的研究，并证实酶活性部位的构象变化先于整体构象变化，并与活性丧失同步。这一点已被甘油醛—3—磷酸脱氢酶、核酶、核糖核酸酶和肌酸激酶的活性部位引入荧光或自旋探剂的结果所证实。;三、用分子生物学方法改进酶的催化特性及设计新酶 （一）酶结构与功能关系研究是关键 以基因手段及蛋白质定点修饰改进酶的特性及设计新酶种是一个革命性导向，而成败的基础在于对自然酶精确的静态及动态结构与催化功能的深入认识，也依赖于对基因模板分子结构与蛋白质合成机制的大量了解，但人类对于关键问题并未深化，在实验研究设计中往往带来很大的盲目片面性和偶然性。因而必须首先对功能基因组进行充分了解，必须阐明酶催化的分子机理，酶分子结构与构象变化的关系，结构与立体专一性，稳定性与变性态，体内多酶系统的定位及高效率催化等。;（二）基因工程酶 对重要实用性的酶进行基因突变、重组、克隆与高效表达，构建优良的工程菌，以及酶的分子设计与定点化学修饰，以改造酶的结构组分、活性、稳定性、特异性及催化功能等，开辟酶的新用途是目前生物技术发展的主流方向。 认真选择一些具有重大应用前景、酶源少又有特殊用途的酶进行基因改良，使其在环境治理，药物合成等方面发挥作用。;（三）酶的蛋白质工程构建 定点突变，化学修饰技术改进工业、医药、环境用酶的催化特性与功能。 定点突变技术只对某些氨基酸残基进行替换，删除添加或修饰，但并不能从根本上动摇酶的高级结构，这种位点突变对酶功能的改建存在一定局限性，而在认识基因组功能、进行基因位点突变并通过多代遗传后，将会构建出非天然的全新设计功能酶和蛋白质。也可用PCR扩增进行任意无序突变、重组筛选和传代获得全新结构的功能酶。;四、构建新酶——核酶、抗体酶、模拟酶、 分子印迹酶 （一）核酶 核酶包括核糖和脱氧核糖。其生化本质分别是小分子的RNA和DNA。 核酶最早又美国Colorade大学的Cech和Altman发现，为一种小分子RNA，具有自身催化剪接功能，又称催化RNA或RNA催化剂。 ;（二）抗体酶 抗体酶是一类具有催化活性的免疫球蛋白，其可变区被赋予了酶的属性，故也称为催化抗体。可催化氧化还原反应、酰基转移反应、金属螯合反应、闭环反应、有机酯、碳酸酯水解反应、立体选择性的内酯反应、酰胺键的生成反应等十余种。 抗体酶的制备方法有诱导法、引入法、拷贝法、化学修饰法、分子印迹法、基因工程法等。;其机理均源于酶反应的过渡态理论，实际上，抗体酶活性中心就是一种天然酶的过渡态类似物。 抗体酶的催化效能可接近天然酶，单链抗体酶还具有分子量小、稳定性好、免疫原性低、容易透过组织膜、易从血液中清除以及不在肾中积累等优点。它的另一个重要特性是可以利用抗体能与抗原结合的特异性制备杂合抗体，因此也是研究抗体导向的靶向药物的一种重要手段。;抗体导向的抗体酶药物前体治疗通过在肿瘤细胞附近靶向激活药物前体，使之转化为细胞毒性物质直接作用于肿瘤细胞的治疗。;（三）模拟酶 模拟酶又称人工合成酶，是利用有机化学方法设计和合成的一些较天然酶更简单的非蛋白质分子，以这些分子作为模型来对其作用底物的结合和催化过程。 模拟主要从三方面进行：整体模拟、活性中心的模拟、类似简单模拟。 模拟酶在结构上必须具有两个特殊部位——底物结合位点和催化位点。;环糊精酶模型：环糊精由多个D型葡萄糖以1，4—糖苷键聚合成环状。;磷酸吡哆醛与磷酸吡哆胺是转氨酶的辅酶，将磷酸吡哆胺连在β—环糊精的b—c原子上，可以模拟转氨酶。 ;（四）分子印迹酶 类似于抗体和酶的结合部位能否在聚合物中产生吗？分子印迹技术起源于免疫学的发展。20世纪40年代，Pauling认为抗原物质进入机体后，蛋白质或多肽链以抗原为模板进行分子自组装，并折叠形成抗体。虽然这个理论后来被“克隆选择理论”所推翻，但却为分子印迹的发展奠定了基础。 ;人们设想，是否可以以一种分子充当模