干细胞--张晓东.pptVIP

南开大学生命科学学院 张晓东; 干细胞研究在1999年和2000年两次入选美国《科学》杂志评选的当年十大科技成果。 干细胞是一种具有多向分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞，在特定条件下，可分化不同的功能细胞，形成多种组织和器官。 干细胞治疗糖尿病，肝病，血液病，老年性痴呆等疾病。 人体组织工程，治疗性人体器官克隆，再造器官。 ; 每一种干细胞的体外获得都会引起临床上治疗的革命。 同时具有巨大的商业前景.全世界干细胞医疗在近两年潜在的市场大约为800亿美元，到2020年前后全球市场规模每年高达4000亿美元。 所以资助干细胞项目意义重大，且是占据生命科学制高点所必须。;基 本 概 念;; 干细胞的分化途径：与干细胞和干细胞所在 微环境的相互作用有关 种子和土壤，两者缺一不可 成人体内存在干细胞。 在人体发育的过程中，成体干细胞存留在多种组织中，在适当环境下具有多系分化能力 ;干细胞分类： 1）全能干细胞：早期胚胎中的原始生殖细胞，具有 发 育成各种组 织和器官的能力，如受精卵和胚 胎干细胞。 2）多能干细胞：具有多种分化潜能，可以分化形成 除自身组织细胞外的其他组织细胞，如造血干细 胞，神经干细胞皮肤干细胞，肝脏干细胞 。 3）专能干细胞：维持某一特定组织细胞的自我更 新。如肠上皮细胞。;干细胞分化的可塑性;干细胞分化的可塑性; 干细胞的分离，建系和鉴定 干细胞的来源： 胚胎干细胞的获得 （囊胚的 内细胞团） 其它干细胞：胚胎干细胞的诱导分化 胚胎组织和成体组织中分离 干细胞体外分化抑制培养：（胚胎干细胞） 1，饲养层培养 2，条件培养基和分化抑制因子（LIF) ;干细胞的鉴定： 1. 胚胎干细胞形态结构和核型 2 .碱性磷酸酶（AKP)染色 3 .胚胎阶段特异性表面抗原（SSEA-1） 免疫荧光标记和端粒酶的测定 4.分化能力检测（体外，体内分化实 验 ，嵌和体形成和核移植） ;干细胞表面标记的鉴定原理; ;;;;造血干细胞的分离纯化与体外扩增 分离技术： 1）物理学方法：根据HSC细胞体积小，密度低等特 征，用速 度离心和密度梯度离心。 2）化学方法：根据造血干细胞和成熟细胞与某些组织 粘附力的不同，将干细胞分离。 3）生物学的方法：原始干细胞处于细胞周期的G0期， 对细胞特异性的细胞毒性药物不敏感，故可用毒性 药物5-Fu等清除增殖细胞，分离处于非细胞周期的 静止期干细胞。 4）免疫学方法：是常用的分离造血干细胞的方法。; FACS ：（荧光激活细胞分选技术 ）是单克隆抗体荧光染色和流式细胞分选相接和。 免疫吸附分离：可用亲和柱层析（造血干细胞被与生物素连接的CD34单克隆抗体 标记，标记好的标本经过抗生物 蛋白过滤柱时，造血干细胞被滞留分离） 也可用免疫磁性分离：方法与上相 似，造血干细胞被与磁性微珠相连的CD34单克隆抗体标记，与磁性微珠标记的干细胞在强磁场过滤柱中被吸附。;;治 疗 应 用; 造血干细胞（HSC） 造血干细胞的生物学： 造血干细胞具有分化为各种髓系细胞和淋巴细胞的 潜能，使多能干细胞，可通过移植重建受损害的造 血和免疫系统。 造血干细胞的发生和迁移： 胚胎的卵黄囊→→→胎儿的肝脏→→→骨髓;造血干细胞的特征和识别： 1）1961年，小鼠脾集落形成实验（骨髓细胞注 射到经 致死量辐射的小鼠后，在其脾脏内发 现许多造血细 胞集落，每个集落含混合的成 熟造血细胞，证明形成脾集落的细胞具有多 种分化潜能。） 2) 骨髓细胞在体外培养分化为混合的成熟细胞 集落细胞, 有以上可知造血干细胞的存在。;造血干细胞表面抗原特征： 干细胞在发育分化的不同阶段其细胞 表面抗原的特征不同，造血干细胞表面分化抗原thy-1,干细 胞抗原1（Sca-1),干细胞因子受体c-kit和CD34等可作为干细 胞的识别标记。 一般用相应的单克隆抗体分离的 Sca-1+ckit+CD34+Lin-细胞多属造血干细胞。其中，干细胞 因子受体c-kit CD34可作为干细胞识别标记。 另外，造血干细胞CD38一般为阴性。; 造血干细胞的调控因子： 集落刺激因子类