研究生开题报告汇编.docVIP

附件一 学术学位研究生学位论文开题报告要求一、开题报告的时间 一般在第学期研究生在导师指导下拟订论文工作计划，在文献阅读、科研调研的基础上递交题报告，开题。 选题 三、开题报告汇报的内容 2、研究内容、技术路线和预期结果（包括具体内容、总体安排、进度和阶段完成目标） 。 3、研究过程中可能遇到的问题和解决方法。 4、已具备的研究条件 四、开题报告的要求 。 。 。 研究生应按照开题报告的内容逐项撰写不少于3000字的开题报告。 开题报告评议专家组一般由三到五名副高以上职称的专家组成。 由召开开题答辩会议，研究生在会议上作开题陈述，开题报告评议专家对该生的论文选题进行集体评议。 开题报告通过者，根据专家组提出的建议，对开题报告进行完善，并。开题报告不通过者，应重新选题并由所在学科点和导师在一个月内重新组织开题。开题全院公开，相关、相近专业和参加未参加者不准予开题。 孟凡飞 年 级 2014 培养科室 检验科 学 号 2002014547 学科专业 临川检验诊断 导 师 蒲晓允 人员类别 博士[ ] 在职博士研究生[ ] 硕士[ ] 在职硕士研究生[ ] 拟定题目 穿孔素适配体的筛选与鉴定 内容是否涉密 学位类别 学术学位 联系方式 导师意见 （请推荐5名论证专家。） 导 师： 年 月 日 推 荐 专 家 姓 名 部 职 别 联系电话 科室意见 科室主任： 年 月 日 医院意见 年 月 日 备 注 第三军医大学第二附属医院 硕士研究生开题论证报告摘要 姓 名 孟凡飞 学 号 2002014547 导师姓名 蒲晓允 学科专业 临床检验诊断 学位类别 科学学位（ ） 专业学位（ ） 课题名称 穿孔素适配体的筛选与鉴定 课题来源 国家自然科学基金 课题经费 （万元） 80万 主要研究 内 容 1.构建ssDNA文库及引物合成：构建长度为81个nt的随机ssDNA文库（南京全式金公司）两端为固定序列，中间35个nt为随机序列，库容量大约为1010，库的序列为P81ss库：CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-(N35)-AGTATCGCTAATCAGGCGGAT，引物P81-SP: 5 -CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-3；引物P81-AP: 5 Biotin-ATCCGCCTGATTAGCGATACT-3 . 2.羧基磁珠包被蛋白：定量穿孔素蛋白溶液与定量磁珠孵育，利用蛋白定量试剂盒计算穿孔素蛋白包被的效率。 3.SELEX过程：适配子筛选主要包括结合、分离、扩增、分离ssDNA、再结合等重复步骤，其中筛选过程主要是在BSA包被的EP管中，ssDNA与酵母tRNA 竞争结合包被了穿孔素蛋白的磁珠，置磁力架吸弃上清，洗去未结合的ssDNA，重复3次。 4.转化与测序：将筛选到的ssDNA序列装入了TA载体转化入大肠杆菌DH5α，挑取单克隆菌株进行通用引物 PCR，将PCR产物纯化后进行DNA测序。 5.亲和力检测及二级结构预测：筛选到的几条ssDNA序列进行native电泳，以原始ssDNA文库为对照，选取亲和力最强的适配体预测其二级结构，不同浓度的适配体同定量的穿孔素蛋白进行native电泳，得到结合力最佳的适配体浓度。 6.特异性检测：将所得的适配体，同γ-干扰素、牛血清白蛋白、补体C9在硝酸纤维素薄膜上进行适配体印记实验，检测适配体特异性。 预期研究 目 标 筛选出高亲和力，高特异性的穿孔素适配体序列。 获取同穿孔素蛋白结合力最佳的适配体浓度。 研制出实现上述目标的检测试剂和规范的操作流程。 主要创新 点及科学 意 义 穿孔素是机体内具有细胞毒作用的，储存在细胞毒性T细胞和NK细胞胞质颗粒中，两种效应细胞与靶细胞接触释放的穿孔素通过聚合作用而在靶细胞表面形成小孔，从而介导杀伤作用。一小段经体外筛选得到的寡核苷酸序列,能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合 技术路线 及 研 究 方案（含主要技术